Кинетика смешанных неконкурентных ингибиторов

Фермент может связываться и с субстратом и с ингибитором с образованием комплексов:

Однако в отличие от конкурентного торможения и субстрат ингибитор способны одновременно связываться с ферментом, образуя тройные комплексы:

Такой комплекс не способен катализировать реакцию.

Обратите внимание, что комплекс EIS может возникать двумя путями, но конечный результат один и тот же - образуется неактивный фермент. Ингибитор может работать одинаково хорошо при низких концентрациях субстрата, когда большая часть молекул фермента находится в форме свободного фермента, и при высоких концентрациях субстрата, когда фермент находится в форме ES комплекса, поскольку ингибитор связывается одинаково хорошо с обоими из них.

Влияние на K_m Классический смешанный неконкурентный ингибитор не оказывает влияния на связывание субстрата, сродство фермента к субстрату и следовательно не влияет на Км.

Смешанный ингибитор позволяет субстрату связываться, но снижает его сродство, так что Км повышается.

Рис 2-11.График Лаинуивера-Берка для неконкурентного классического(слева) и смешанного типов ингибиторов

Влияние на V_max Неконкурентные и классический и смешанный варианты, тормозят активность при высоких концентрациях субстрата, так что Vmax снижается.

Влияние на V_max/K_m Неконкурентные ингибиторы могут работать при низких концентрациях субстрата так, что V_max/K_m снижается

График Лайнуивера-Берка для типичного классического смешанного неконкурентного ингибитора и для смешанного неконкурентного приведены на рис 2-11.

Обратите внимание, что на графике справа (рис 2-11) для смешанного конкурентного ингибитора две линии по разному пересекают 1/ [S], указывая на увеличение Км, хотя на графике для классического смешанного неконкурентного ингибитора, значения Km идентичны. Однако оба графика показывают увеличение наклона в пересечении на оси 1/V, демонстрируя, что ингибитор является эффективным при высоких и низких концентрациях фермента.

Заключение. Смешанные неконкурентные ингибиторы связываются с центром, который является отдаленным от активного центра. Они тормозят активность фермента, вызывая изменения конформации, препятствующие превращению субстрата в продукт. Субстрат и ингибитор способны к связыванию с ферментом одновременно, образуя тройной комплекс. Это означает, что ингибитор не конкурирует с субстратом при высоких концентрациях субстрата и работает одинаково хорошо и при низких и высоких концентрациях субстрата. Правда способность связываться (сродство) с комплексом ингибитор+фермент у субстрата может снижаться, хотя на практике нет особых различий между так называемым смешанным ингибитором и классическим неконкурентным ингибитором.