Графическое изображение в двойных обратных координатах

Использование графиков, построенных в двойных обратных координатах для анализа данных, полученных при исследовании ингибирования ферментативных реакций, позволяет легко отличать конкурентные ингибиторы от неконкурентных. Проводятся две серии опытов по определению скорости реакции при одной и той же концентрации фермента. В одной серии концентрация субстрата тоже остается постоянной и соответствующими экспериментальными методами определяется влияние повышения концентрации ингибитора на начальную скорость реакции. В другой серии, наоборот, концентрация ингибитора поддерживается постоянной, но используются разные концентрации субстрата. На основе данных, полученных в опытах той и другой серии, строят графики в координатах {1/[S]; 1/V₀}. На рис. 4 представлены такие графики, полученные в отсутствие ингибитора и при двух разных концентрациях конкурентного ингибитора.

Рисунок 4 – Графики ферментативных реакций, протекающих в присутствии конкурентного и неконкурентного ингибитора

В случае конкурентных ингибиторов получается семейство прямых с разными углами наклона, пересекающихся в одной точке на оси 1/V₀. Поскольку отрезок, отсекаемый на оси 1/V₀, численно равен величине 1/V_max, ясно, что V_maxне изменяется в присутствии конкурентных ингибиторов. Это означает, что независимо от концентрации конкурентного ингибитора всегда можно подобрать достаточно высокую концентрацию субстрата, при которой субстрат вытеснит конкурентный ингибитор из активного центра.

При неконкурентном интибировании аналогичные графики представляют собой семейство прямых (рис. 4), пересекающихся с осью 1 /[S] в одной точке и отсекающих на ней отрезок, численно равный – 1/ К_м. Это свидетельствует о том, что величина К_м не изменяется при изменении концентрации неконкурентного иигибитора, тогда как величина V_max при этом уменьшается.

Неконкурентное ингибирование фермента можно отличить от конкурентного путем анализа кинетических данных, выраженных графически в двойных обратных координатах (Рисунок 4). Наиболее важные неконкурентные ингибиторы представляют собой образующиеся в живых организмах промежуточные продукты метаболизма, способные обратимо связываться со специфическими участками на поверхности некоторых регуляторных ферментов и изменять при этом активность их каталитических центров.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1 Ленинджер, А. Основы биохимии: в 3 т./пер. с англ.; под ред. Акад. В.А. Энгельгарта, Я.М. Варшавского: - Мир, 1985. – 359с.;

2 Сафарова, В.Г. Химия биологически активных веществ: учеб.пособие/В.Г. Сафарова, В.В. Зорин – Уфа: Изд-во УГНТУ, 2007. -127 с.;

3 ВИКИПЕДИЯ [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://ru.wikipedia.org/wiki - Загл. с экрана.