Оценка антибактериальной активности стандартных веществ

Протокол

Высеивание бактерий.

Сначала проверяли известные АБП, для которых уже установлена активность в отношении штамма ATCC 25923 Staphilococcus aureus (S.aureus) и штамма 103 Pseudomonas aerugenosa (P.aerugenosa). Для S.aureus использовали 14 стандартных АБП (Отдел Новых Технологий НИИ Пастера, Санкт-Петербург); на одну чашку Петри диаметром 90 мм можно выложить только 6 дисков, поэтому S.aureus высеивали на 3 чашки. Для P.aerugenosa использовали 11 стандартных АБП, поэтому высеивали на 2 чашки.

Эта процедура проводилась с целью проверки правильности используемой методики и в дальнейшем с целью сравнения коммерческих препаратов с активностью новосинтезированных веществ.

На чашки Петри с застывшей MHA средой наливали по 100 мкл инокулюма S.aureus и P.aerugenosa. Для равномерного распределения инокулюма по питательной среде насыпали стеклянные шарики и трясли чашку в горизонтальной плоскости. После распределения культуры шарики высыпали в дезинфицирующий раствор. Чашки оставляли закрытыми на 10 минут до подсыхания поверхности агара.

Аппликация дисков.

Не более чем через 10 минут после высева бактерий, наносили диски на поверхность чашки Петри с питательной средой. Расстояние между дисками должно быть 2 см друг от друга. Аппликацию дисков проводили стерильным пинцетом (стерилизованным в спирте и пронесенным над пламенем горелки)

Результаты оценивали на следующий день.

Вокруг каждого диска наблюдали зоны (круги) подавления роста бактерий различного диаметра, либо их отсутствие.

Для того, чтобы определить, насколько чувствительна конкретная бактерия к данному препарату, измеряли диаметр зоны подавления роста и по их стандартным значениям, в соответствии с инструкциями, определяли принадлежность бактерии к одной из 3-х категорий:

◦R – резистентность к АБП;

◦S – чувствительность к АБП;

◦ I – умеренная чувствительность МО к АБП.

Результаты

В результате проведенного исследования мы получили различные зоны подавления роста S. aureus и P. Aeruginosa стандартными АБП. Полученные диаметры представлены на рисунке 3.

Рис.3. Диаметры зон подавления роста S. aureus и P. Aeruginosa стандартными АБП.

 

Интерпретацию полученных результатов проводили при сравнении со стандартами, приведенными в таблице 1 и таблице 3 [Семина и др.,2004].

Значения диаметров образовавшихся в проведенном эксперименте зон подавления роста на чашках с S. aureus и P. Aeruginosa представлены в таблице 2 и в таблице 4, соответственно.

 

№	АБП	Диаметр зон подавления роста (см)
R	I	S
	Рифампицин	ß*	1,7 – 1,9	à
	Фузидин	ß	1,5 – 2,1	à
	Левофлоксацин	ß	1,9 – 2,1	à
	Ципрофлоксацин	ß	1,6 – 2,0	à
	Гентамицин	ß	1,3 – 1,4	à
	Клиндамицин	ß	1,5 – 2,0	à
	Левомицетин	ß	1,7 – 2,0	à
	Ко-тримоксазол	ß	1,1 – 1,5	à
	Доксициллин	ß	1,3 – 1,5	à
	Ванкомицин	-	-	>1,5
	Эритромицин	ß	1,4 – 2,2	à
	Оксациллин	ß	1,1 – 1,2	à
	Линезолид	-	-	>2,1
	Бензилпенициллин	-	-	-

 

Таблица 1. Критерии интерпретации результатов определения чувствительности

Staphilococcus aureus. *, меньшим (ß) или большим (à) диаметром зон подавления роста соответствуют резистентность (R) и чувствительность (S) бактерий к данному виду препарата соответственно.

№	АБП	Диаметр (см)	R/S/I
	Рифампицин	2,7	S
	Фузидин	2,4	S
	Левофлоксацин	2,3	S
	Ципрофлоксацин	2,3	S
	Гентамицин	2,1	S
	Клиндамицин	2,1	S
	Левомицетин	2,0	S
	Ко-тримоксазол	1,8	S
	Доксициллин	1,6	S
	Ванкомицин	1,6	S
	Эритромицин	1,9	I
	Оксациллин	1,2	I
	Линезолид	2,0	R
	Бензилпенициллин	-	R

Таблица 2. Результаты определения чувствительности Staphilococcus aureus

Вывод: Staphilococcus aureus чувствителен ко многим АБП, обладает почти полной устойчивостью к бета-лактамным антибиотикам (бензилпенициллин, оксациллин), к некоторым макролидам (эритромицин).

№	АБП	Диаметр зон подавления роста (см)
R	I	S
	Меропенем	ß	1,4 – 1,5	à
	Тикарциллин	ß	1,5 – 1,9	à
	Цефтазидим	ß	1,5 – 1,7	à
	Цефоперазон	ß	1,6 – 2,0	à
	Цефепим	ß	1,5 – 1,7	à
	Гентамицин	ß	1,3 – 1,4	à
	Амикацин	ß	1,5 – 1,6	à
	Ципрофлоксацин	ß	1,6 – 2,0	à
	Имипенем	ß	1,4 – 1,5	à
	Ампициллин	ß	1,2 – 1,4	à
	Ко-тримоксазол	ß	1,1 – 1,5	à

 

 

Таблица 3. Критерии интерпретации результатов определения чувствительности