Pseudomonas aerugenosa

№	АБП	Диаметр (см)	R/S/I
	Меропенем	2,1	S
	Тикарциллин	1,8	I
	Цефтазидим	0,7	R
	Цефоперазон	0,8	R
	Цефепим	1,2	R
	Гентамицин	-	R
	Амикацин	0,7	R
	Ципрофлоксацин	0,9	R
	Имипенем	-	R
	Ампициллин	-	R
	Ко-тримоксазол	-	R

Таблица 4. Результаты определения чувствительности Pseudomonas aerugenosa

Вывод: Pseudomonas aerugenosa полирезистентна, но обладает чувствительностью к некоторым препаратам из группы бета-лактамных антибиотиков, таких как меропенем, тикарциллин.

Оценка антибактериальной активности впервые синтезированных веществ

Протокол

Приготовление дисков с впервые синтезированными веществами.

Названия веществ: L1912, 174A, S1, S2, Pr1, Pr2, A1, A2, A3, A4.

Чистые диски для ДДМ необходимо пропитать исследуемыми веществами. С помощью ДДМ можно не только выявить, обладает ли АБП активностью в отношении той или иной бактерии, но и приблизительно оценить МПК препарата. Для этого соответствующий АБП надо приготовить в разных концентрациях (сделать разведения), и каждым таким разведением пропитать диски.

Для каждого из 10 веществ в этой работе готовили по 3 рабочих концентрации: 1x10^-5 М, 1x10^-6 М, 1x10^-7 М.

Изначально АБП были растворены в диметилсульфоксиде (ДМСО) в концентрации 1x 10^-3 М.

Каждое разведение готовили с конечным объемом (Vкон), равным 1 мл. В качестве растворителя брали дистиллированную воду. Для получения 3-х рабочих концентраций АБП исходную концентрацию 1x10^-3 М разводили в 100 раз для получения 1x10^-5 М, эту концентрацию разводили в 10 раз до 1x10^-6 М, и последнюю снова разводили в 10 раз до 1x10^-7 М.

Объемы реагентов для приготовления разведений представлены в таблице 5.

	Реагенты для приготовления
Разведение	Дист. вода (мкл)	Раствор АБП
1x10-5 М		10 мкл 1x10-3 М р-ра
1x10-6 М		100 мкл 1x10-5 М р-ра
1x10-7 М		100 мкл 1x10-6 М р-ра

Таблица 5. Объемы реагентов для разведений.

После приготовления каждое разведение перемешивали на мешалке (Vortex) перед тем, как готовить из него следующее.

Для достоверности проверяли активности АБП с 1x10^-3 М концентрацией. Для каждого организма исследовали по 10 веществ, поэтому для двух бактерий Staphilococcus aureus и Pseudomonas aerugenosa брали 20 чашек Петри. На одной чашке располагали по 4 диска (с концентрациями 1x10^-3 М, 1x10^-5 М, 1x10^-6 М и 1x10^-7 М), поэтому всего использовали 80 дисков (10 веществ по 4 диска с 4-мя концентрациями для 2 видов бактерий).

Нанесение АБП на диски.

На диски наносили отдельно по 10 мкл каждого разведения АБП (с концентрациями 1x10^-3 М, 1x10^-5 М, 1x10^-6 М и 1x10^-7 М). Нанесение производили на пустых чашках Петри. Для каждого вещества использовали отдельную чашку.

Высеивание бактерий.

На 10 чашек Петри с застывшей MHA наносили по 100 мкл ночной культуры S.aureus. Насыпали стеклянные шарики, раскатывали их по горизонтальной плоскости и высыпали в дезинфицирующий раствор. Оставляли чашки (обязательно закрытые) на 10 минут до подсыхания поверхности агара.

Аналогичную процедуру проводили с P.aerugenosa.

 

Аппликация дисков.

Через 10 минут после высева бактерий стерильным пинцетом наносили приготовленные диски с разными концентрациями каждого АБП на чашки Петри на расстоянии 2 см друг от друга, слегка прижимая к питательной среде. На одну чашку выкладывали по 4 диска каждого АБП (с концентрациями 1x10^-3 М, 1x10^-5 М, 1x10^-6 М и 1x10^-7 М).

После окончания работы чашки оставляли на ночь до появления результатов.

Результаты

Зона подавления роста появилась только на культуре Staphilococcus aureus с веществом S2, находившемся в концентрации 1x10^-3 М. Диаметр зоны был равен примерно 7 мм, что позволило сделать вывод об умеренной чувствительности этого вида бактерий к данному препарату.

Заключение

Одним из результатов исследования стало отнесение микроорганизмов (Staphilococcus aureus штамм ATCC 25923 и Pseudomonas aerugenosa штамм 103) к той или иной категории чувствительности к определенным АБП. Несмотря на то, что применение диско-диффузного метода дает возможность лишь косвенно судить о величине МПК, данный метод позволил выявить наличие слабой антибактериальной активности одного из новых химических соединений – потенциального лекарственного препарата.