double arrow
Эритроцитарныедиагностикумы

2

В настоящее время разработаны методы приготовленияэритроцитарныхдиагностикумов с длительным сроком годности. Действующим началом их являются извлеченные из тех или иных микроорганизмов антигены, которыми сенсибилизированы эритроциты.

Принцип приготовления эритроцитарныхдиагностикумов сводится к следующему: дефибринированная кровь человека О (1) группы или барана фильтруется через марлю и трижды отмывается на центрифуге охлажденным физиологическим раствором. После этого производится обработка эритроцитов формалином. Готовят взвесь, содержащую 12,5 % эритроцитов, в нее помещают целофановый мешок с формалином и встряхивают на шюттель-аппарате в течение 16 часов. В первые 2 часа формалин поступает через поры целофана, затем его прокалывают и, наконец, разрывают. Этот прием позволяет получить медленное вначале и постепенно усиливающееся действие формалина на эритроциты. По окончании срока встряхивания эритроциты вновь фильтруют через марлю, отмывают 6 раз десятикратным объемом охлажденного до 4-5 °С физиологического раствора на центрифуге при 2500-3000 об/мин, соединяют с равным объемом стерильного нейтрального физиологического раствора и разливают во флаконы. В таком виде формалинизированные эритроциты можно хранить до года. В дальнейшем, в зависимости от характера антигена, эти эритроциты либо обрабатывают дополнительно таннином, либо соединяют с антигеном без этой обработки.




Так, для приготовления дифтерийного и столбнячного эритроцитарныхдиагностикумов, формалинизированные эритроциты отмывают один раз физиологическим раствором (рН 7,2), разводят их до 2,5 % концентрации, добавляют равный объем таннина в разведении 1:20000, взбалтывают и выдерживают 15 минут при комнатной температуре. Затем эритроциты отмывают 3 раза пятью-шестью объемами физиологического раствора (рН 7,2). Проверяют на отсутствие спонтанной агглютинации, готовят 2,5 % взвесь, к которой прибавляют очищенные, концентрированные анатоксины - дифтерийный (10-20 Lf на один миллилитр взвеси) или столбнячный (5-10 ЕС на один миллилитр взвеси).

Смесь выдерживают при 37 °С - 3 часа. За один час до окончания инкубации добавляют 1 % формалина, встряхивают жидкость до образования равномерной взвеси. После этого срока эритроциты снова отмывают три раза нейтральным физиологическим раствором, содержащим 1 % формалина. Отмытые сенсибилизированные эритроциты разводят фосфатно-буферным раствором (рН 7,0) с формалином (1 %) так, чтобы в 0,05 мл взвеси содержалось 6-8 млн. эритроцитов (подсчет в камере Горяева). В препарате проверяют густоту взвеси, отсутствие спонтанной агглютинации, специфическую активность с соответствующими иммунными сыворотками. Для контроля применяют эритроциты, обработанные таким же способом только не сенсибилизированные антигеном.



Срок годности столбнячного и дифтерийного эритроцитарныхдиагностикумов - 6 месяцев.

При изготовлении туляремийногоэритроцитарногодиагностикумаформалинизированные эритроциты сенсибилизируют антигеном, полученным по методу Буавена и Мезробеану из высушенных туляремийных бактерий.

Для постановки реакции употребляют 2,5 % взвесь сенсибилизированных эритроцитов. Активность препарата проверяют в реакции непрямой гемагтлютинация с агглютинирующей противотуляремийной сывороткой. Если сенсибилизированные эритроциты агглютинируются этой сывороткой в разведении ее меньшем, чем предусмотрено инструкцией - эритроцитарныйдиагностикум бракуется.

Срок годности препарата - 9 месяцев.

Помимо вышеперечисленных антигенов для диагностики эпидемического сыпного тифа и крысиного риккетсиоза применяется антиген, приготовленный из легких белых мышей, зараженных риккетсиями Провачека и Музера.

Богатые риккетсиями мышиные легкие размельчаются в ступке с кварцевым песком и разводятся формалинизированным физиологическим раствором из расчета 3-4 мл на легкое.

Далее формалинизированная взвесь центрифугируется дважды: один раз при 1500 оборотах в минуту для удаления тканевых примесей, другой раз при 3000 оборотах в минуту для получения риккетсий в осадке. Осадок обрабатывается физиологическим раствором, содержащим 0,4 % формалина и 0,5 % фенола.

В дальнейшем он подвергается обработке эфиром, после чего к нему добавляется сахароза и производится высушивание из замороженного состояния в условиях глубокого вакуума.

Готовый препарат представляет собой сухой антиген из хорошо очищенных убитых формалином риккетсий, подвергнутый контролю по вышеописанной методике.

2





Сейчас читают про: