Диагностические препараты, содержащие антигены (диагностикумы, эритроцитарныедиагностикумы, антигены). Получение и применение

Диагностические препараты применяются для следующих целей:

1) для определения с помощью специфических иммунных сывороток вида или типа микроба выделенного от больного, носителя или из объектов внешней среды;

2) для обнаружения с помощью диагностикумов антител в сыворотке больных или реконвалесцентов;

3) для выявления с помощью аллергенов перестройки организма, возникающей при некоторых инфекционных заболеваниях.

Все диагностические препараты представляют собой антигены или антитела.

Общие сведения о диагностикумах

Диагностикумы - это взвеси убитых микробов, чаще всего в физиологическом растворе, применяемые в качестве антигенов для серологических реакций.

Преимущество диагностикумов перед живой культурой заключается в стабильности их агглютинабильных свойств, стандартности, безопасности и простоте обращения с ними. Использование диагностикумов дает возможность широко применять серологические методы в практике массовой работы. Особое значение имеют диагностикумы в случаях, когда работа с живыми бактериями или вирусами опасна из-за их высокойинфекционности (например, с бруцеллами, туляремийными бактериями, вирусами клещевого и японского энцефалитов и др.).

Диагностикумы, используемые для распознавания инфекционных заболеваний, делятся на бактерийные, риккетсиозные и вирусные. С их помощью в сыворотке больных можно определить наличие антител по отношению к определенному виду микроба-возбудителя.

Бактерийные диагностикумы

Для приготовления бактерийныхдиагностикумов берется агаровая суточная культура определенного вида микроба, находящегося в S-форме.

Производство диагностикумов, как и всех биологических препаратов, требует стерильных условий.

Проверенные 18-20 часовые агаровые культуры или 4 часовые бульонные засевают на матрацы с агаром, приготовленным на мясном, дрожжевом или казеиновом гидролизате. Через 18-20 часов инкубации в термостате при 37 °С из культур делают мазки (с каждого матраца отдельно) для проверки чистоты. Затем культуру смывают физиологическим раствором и полученную взвесь разных штаммов одного вида микробов сливают в одну градуированную бутыль. При массовом производстве применяется котловой метод выращивания бактерий. Диагностикумы готовят из разных количеств штаммов соответствующих микробов.

Густоту маточной взвеси определяют по оптическому стандарту. Допускается получение маточной взвеси, содержащей в 1 мл 10 млрд. микробных тел. Далее маточная взвесь инактивируется. Инактивацию можно проводить различными способами: прогреванием, действием формалина, алкоголя и др. Так, для определения фагоцитарной активности лейкоцитов диагностикумы готовят из микробов, убитых нагреванием, так как фенол или формалин обусловливают отрицательный хемотаксис лейкоцитов.

Готовыйдиагностикум проверяют на агглютинабильность гомологичной агглютинирующей сывороткой и для выявления групповых агглютининов - гетерологичными сыворотками. Кроме того, диагностикум испытывают в реакции агглютинации с сыворотками здоровых людей (5 сывороток). Реакцию агглютинации с диагностикумами ставят по классической методике.

В ряде случаев для целей серологической диагностики применяют не корпускулярные диагностикумы, а выделенные из микробных тел антигены.

Микробная клетка представляет собой сложный глюцидо-липоидно-полипептидный комплекс, в который входят как полноценные антигены, так и гаптены. Изготовление полных антигенов проводится по способу Буавена и Мезробеану. Для этой цели берут хорошо изученную чистую культуру определенного вида микробов и производят посев на питательные среды. Через сутки инкубации при 37 °С смыв культуры дважды промывают (при центрифугировании), физиологическим раствором, затем экстрагируют при низкой температуре десятикратным количеством 1/4 N раствора трихлоруксусной кислоты. Экстракт нейтрализуют углекислой содой до рН 7,0 и диализуют в течение 2 суток в текучей водопроводной воде и в течение 1 суток - в дистиллированной воде. Диализованный экстракт осаждают четырьмя объемами ацетона, растворяют в дистиллированной воде и вторично осаждают ацетоном. Полученный осадок полного антигена промывают спиртом и эфиром, высушивают и хранят в виде сухого порошка.

Антигены из микробных клеток извлекают и другими способами: многократным замораживанием с последующим оттаиванием, кипячением, действием ультразвука, спирта, соляной кислоты и др.

Бактерийные антигены применяются в реакциях преципитации, пассивной гемагглютинации с диагностическими целями и для изучения антигенного аппарата микробов и их типизации.