double arrow

ТЕМА 3. РЕАКЦИИ ИММУНИТЕТА (1 ЗАНЯТИЕ)

Одной из форм иммунологической реактивности является способность организма к выработке антител в ответ на антиген. Антигеном является вещество определенной химической структуры, несущее чужеродную генетическую информацию. Антигены бывают полноценные, то есть способные вызывать синтез антител и связываться с ними, и неполноценные или гаптены. Гаптены способны только связываться с антителом, но не вызывать его синтез в организме. Бактерии и вирусы представлены сложной системой антигенов (таблицы 4,5), некоторые их них обладают токсическими и иммуносупрессивными свойствами.

Таблица 4

Антигены бактерий

Связанные со структурой клетки Продуцируемые клеткой
О-аг – соматический (пептидогликан) Фибринолизин
Н-аг – жгутиковый (флавопротеин) Лецитиназа
К-аг – капсульный (А-аг, Vi-аг, L-аг) Гиалуронидаза
Антигены мембранных структур (липопротеиды) Экзотоксины

Таблица 5

Антигены вирусов

Связанные с вирионом Связанные с зараженной клеткой
Антигены белков слияния Антигены, экспрессированные на поверхности клетки
Антиген капсида   Антигены, встроенные в мембрану клетки
Антиген суперкапсида -
Антиген нуклеопротеида -

Иммунологические методы исследования — диагностические методы исследования, основанные на специфическом взаимодействии антигенов и антител. Широко используются для лабораторной диагностики инфекционных болезней, определения групп крови, тканевых и опухолевых антигенов, видовой принадлежности белка, распознавания аллергии и аутоиммунных болезней, беременности, гормональных нарушений, а также в научно-исследовательской работе. Они включают серологические реакции, к которым относят обычно реакции прямого воздействия антигенов и антител сыворотки крови in vitro. В зависимости от механизма серологические реакции можно подразделить на реакции, основанные на феномене агглютинации; реакции, основанные на феномене преципитации; реакции лизиса и реакция нейтрализации.

Реакции, основанные на феномене агглютинации. Агглютинация представляет собой склеивание клеток или отдельных частичек — носителей антигена с помощью иммунной сыворотки к этому антигену. Реакция агглютинации бактерий с использованием соответствующей антибактериальной сыворотки относится к наиболее простым серологическим реакциям. Взвесь бактерий добавляют к различным разведениям испытуемой сыворотки крови и через определенное время контакта при 37° регистрируют, при каком наивысшем разведении сыворотки крови происходит агглютинация. Выделяют мелкозернистую и крупнохлопчатую реакции агглютинации. При связывании через Н-антиген бактерий образуются осадок из крупных конъюгатов аг-ат, в виде хлопьев. При контакте с О-аг появляется мелкозернистый осадок. Реакцию агглютинации бактерий используют для диагностики многих инфекционных болезней: бруцеллеза, туляремии, брюшного тифа и паратифов, кишечных инфекций, сыпного тифа.

Реакция пассивной, или непрямой, гемагглютинации (РПГА, РНГА). В ней используют эритроциты или нейтральные синтетические материалы (например, частицы латекса), на поверхности которых сорбированы антигены (бактериальные, вирусные, тканевые) или антитела. Их агглютинация происходит при добавлении соответствующих сывороток или антигенов. Эритроциты, сенсибилизированные антигенами, называют антигенным эритроцитарным диагностикумом и используют для выявления и титрования антител. Эритроциты, сенсибилизированные антителами. называют иммуноглобулиновыми эритроцитарными диагностикумами и применяют для выявления антигенов. Реакцию пассивной гемагглютинации используют для диагностики заболеваний, вызванных бактериями (брюшной тиф и паратифы, дизентерия, бруцеллез, чума, холера и др.), простейшими (малярия) и вирусами (грипп, аденовирусные инфекции, вирусный гепатит В, корь, клещевой энцефалит, крымская геморрагическая лихорадка и др.).

Реакции, основанные на феномене преципитации. Преципитация происходит в результате взаимодействия антител с растворимыми антигенами. Простейшим примером реакции преципитации является образование в пробирке непрозрачной полосы преципитации на границе наслоения антигена на антитело. Широко применяют различные разновидности реакции преципитации в полужидких гелях агара или агарозы (метод двойной иммунодиффузии по Оухтерлони, метод радиальной иммунодиффузии, иммуноэлетрофорез), которые носят одновременно качественный и количественный характер. В результате свободной диффузии в геле антигенов и антител в зоне оптимального их соотношения образуются специфические комплексы— полосы преципитации, которые выявляют визуально или при окрашивании. Особенностью метода является то, что каждая пара антиген— антитело формирует индивидуальную полосу преципитации, и реакция не зависит от наличия в исследуемой системе других антигенов и антител.

ЗАДАНИЕ

1.Поставить ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. Для этого на предметное стекло пипеткой наносят каплю диагностической сыворотки и рядом каплю физиологического раствора. В каждую пробу с помощью бактериологической петли вносят небольшое количество бактериальной культуры и эмульгируют. Через 2-4 минуты в положительном случае в пробе с сывороткой появляются хлопья, кроме того капля становится прозрачной. В контрольной пробе капля остается равномерно мутной.

2.Поставить развернутую реакцию агглютинации. Для постановки реакции взять 6 пробирок. Первые 4 пробирки являются опытными, 5 и 6 –контрольными. Во все пробирки кроме 1 вносят 0,5мл физ.раствора. В первых 4 пробирках провести титрование исследуемой сыворотки (1:50; 1:100; 1:200; 1:400). Во все пробирки, кроме 5-й внести 0,5мл антигена. Пробирки встряхнуть и поставить в термостат (370С) на 2 часа, затем оставить пробы в комнатной температуре на 18часов. Учет результатов проводят по следующей схеме:

++++ полная агглютинация, хорошо выраженный хлопьевидный осадок, надосадочная жидкость прозрачная

+++ неполная агглютинация, выраженный осадок, надосадочная жидкость слегка мутная

++ частичная агглютинация, есть небольшой осадок, жидкость мутная

+ частичная агглютинация, осадок слабо выражен, жидкость мутная

- агглютинации нет, осадка нет, жидкость мутная.

3.Ознакомиться с постановкой реакции преципитации при диагностике токсигенного штамма C.diphtheriae.

4. Разобрать схемы прямой и непрямой реакций Кумбса.

Контрольные вопросы

1. Иммунитет, его виды

2. Центральные и периферические органы иммунитета. Функции, строение.

3. Основные клетки, задействованные в иммунных реакциях.

4. Классификация антигенов, свойства антигенов, свойства гаптенов.

5. Антигенное строение бактериальной клетки, вируса.

6. Гуморальный иммунитет: особенности, основные клетки, задействованные в гуморальном иммунитете.

7. В-лимфоциты, строение клетки, фазы созревания и дифференцировки.

8. Т-лимфоциты: строение клетки, фазы созревания и дифференцировки.

9. Трехклеточная кооперация в иммунном ответе.

10. Классификация иммуноглобулинов.

11. Строение иммуноглобулина.

12. Неполные антитела, строение, значение.

13. Реакции иммунитета, классификация.

14. Реакция агглютинации, варианты постановки, диагностическое значение.

15. Реакция Кумбса, схема постановки, диагностическое значение.

16. Реакция преципитации, варианты постановки, диагностическое значение.


Понравилась статья? Добавь ее в закладку (CTRL+D) и не забудь поделиться с друзьями:  



Сейчас читают про: