Экспресс-анализ подлинности маточного молочка пчел

Следует учитывать, что в отличие от других продуктов пче­ловодства маточное молочко наиболее лабильный продукт, нуждающийся в определенных условиях его получения и хранения. Имеющиеся технические условия на молочко маточное пче­линое (ГОСТ 28888-90), позволяющие оценить качество продук­та, достаточно трудоемки и выполнимы только в крупной лабо­ратории. В связи с этим нами разработан и предлагается экс­пресс-метод анализа подлинности пчелиного маточного молоч­ка, который может быть воспроизведен как в лаборатории с минимальным обеспечением, так и в полевых условиях пасек,

В основу метода положено обнаружение в исходном продукте 10-окси-2-децсновой кислоты, являющейся специфической для маточного молочка пчел и, по-видимому, ответственной за большинство физиологических эффектов, производимых его применением как продукта пчеловодства. Однако, в отличие от аналогичного определения этой кислоты по ГОСТу предлагает­ся более удобный и легко осуществимый способ ее обнаружения После распределительного хроматографирования В гонком слое адсорбента на пластинах "Силуфол''. Указанные пластины под­вергаются предварительной подготовке и далее могут быть ис­пользованы в полевых и стационарных условиях.

Подготовка пластин осуществляется следующим образом. Стандартные пластины для тонкослойной хроматографии "Силуфол УФ-254" нарезают на полосы длиной 15 см и шири­ной 5 см. Полосы для активизации адсорбента надевают в су­шильном шкафу 30-40 мин. при температуре +105°С, после чего их помещают в герметичный сосуд для хранения (эксикатор или аналогичную посуду).

Экстракцию липидной фракции маточного молочка осу­ществляют диэтиловым эфиром. Для этого отвешивают 200 мг молочка в стеклянной емкости на 25-50 мл и приливают 2 3 мл эфира. Интенсивно перемешивают стеклянной палочкой I ми­нуту. Эфир сливают в фарфоровую чашку. Процесс экстракции эфиром повторяют трижды.

Эфир из чашки испаряют, а оставшийся осадок растворяют в 1 мл хлороформа. На подготовленной пластине на расстоянии 1,5 см от нижнего края намечают стартовую линию и точку, на которой с помощью микробюретки (объемом 0,1 мл) или мик­рошприца (или шприца с тонкой иглой) наносят хлороформный раствор липидов маточного молочка. Раствор наносят осторож­но, не нарушая слоя адсорбента в 10 приемов, высушивая после каждого. Диаметр капель на пластине не должен превышать 5 мм.

Пластину с нанесенным экстрактом ставят в хроматографи-ческую камеру. Она представляет собой стеклянный сосуд лю-

бой формы с плоским дном и притерной крышкой. Пластину ставят в вертикальном положении. На дно камеры наливают растворитель. Для тонкослойной хроматографии липидов ма­точного молочка наиболее эффективным зарекомендовал себя следующий растворитель: гександиэтиловый эфир хлороформ-ледяная уксусная кислота в соотношении 75:25:25:2. Раствори­тель наливают в камеру в таком количестве, чтобы нижний край пластины был погружен в жидкость на 5 мм. Для насыщения воздуха камеры парами растворителя внутри сосуда укрепляют вдоль стенки фильтровальную бумагу, смоченную растворите­лем. Камеру закрывают крышкой.

При прохождении фронта растворителя в восходящем на­правлении 10 см (можно заранее нанести черту на пластину) от линии старта, что длится 10-15 минут, пластину вынимают. После просушивания на воздухе, пластину помешают в камеру с проявителем.

Проявителем 10 окси-2-дененовой кислоты маточного молоч­ка были выбраны пары йода. Кроме своей специфической реак­ции с двойными связями ненасыщенных жирных кислот, ука­занный галоген удобен тем, что из металлического состояния возгоняется при комнатной температуре. Полому достаточно в герметично замкнутый сосуд поместить несколько крупинок ме­таллического иода, чтобы создать атмосферу, насыщенную его парами. Через 10 20с после помещения в сосуд с парами йода пластина окрашивается в светло-фиолетовый (фон), на котором проявляются пятна липидов маточного молочка. При этом во фракции I (считая от линии старта) обнаруживается 10-окси-2-деценовая кислота маточного молочка, имеющая отличный от других пятен липидов ярко-желтый цвет при Rf = 0,06. При по­мещении проявленной пластины в УФ-свет указанное пятно да-ет насыщенный темно-синий цвет.

Контроль положения и окраски искомой кислоты в назван­ных условиях может быть проведен путем параллельного хро-матографирования на той же пластине собственно 10-окси-2-деценовой кислоты, выделенной из липидной фракции маточно­го молочка по методике, описанной в вышеназванном ГОСТе. В этом случае на хроматограмме проявляется только названная кис­лота, имеющая соответствующие ярко-желтый цвет и величину Rf.

Разработанный экспресс-метод определения подлинности ма­точного молочка пчел успешно апробирован в условиях лаборатории и пасек опытно-промышленного племенного пчеловодческого хозяйства «Краснополянское».