Работа с микроскопом

ПРИЛОЖЕНИЕ

Работа с микроскопом

ПРИЛОЖЕНИЕ

Перед началом работы необходимо правильно настроить освещение микроскопа (принцип Келера).

1. Поместить объект (препарат) на столик микроскопа.

2. С помощью рукояток грубой и тонкой фокусировки добиться резкости изображения объекта.

3. Убрать из хода лучей нижнюю линзу конденсора (линзу большого поля) и фильтры.

4. Движением конденсора вверх-вниз добиться резкости изображения полевой диафрагмы осветителя.

5. С помощью винтов на конденсоре переместить изображение полевой диафрагмы в центр поля зрения.

6. Открыть полевую диафрагму до размера поля видения. Окрашенный препарат кладут на предметный столик микроскопа,

предназначенный для крепления препарата с помощью препаратодер-жателя и его фиксации в определенном положении. Благодаря препа-ратоводителю препарат перемещается в любом направлении.

1. На высохшую каплю наливают краску Романовского-Гимзы, обычного разведения. Продолжительность окрашивания - 30-50 мин.

2. Осторожно споласкивают в воде и затем просушивают в вертикальном положении (фильтровальную бумагу применять нельзя).

Ввиду того что гемоглобин в водных растворах краски выщелачивается, эритроциты в окрашенной капле не видны.

Морфология паразита в «толстой капле» менее ясная, чем в мазке.

В мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе, отчетливо видна голубая протоплазма паразита с ядром, окрашенным в розовый или красный цвет. Форма плазмодиев различна в зависимости от стадии развития. В зрелых плазмодиях определяют темно-коричневые пигментные включения. Паразиты находятся в эритроцитах, но могут располагаться и свободно.

Иммуноцитохимические, морфометрические и радиоавтографические методы исследования в цитологии подробно освещены в специальных руководствах и методических рекомендациях.

Перед началом работы необходимо правильно настроить освещение микроскопа (принцип Келера).

1. Поместить объект (препарат) на столик микроскопа.

2. С помощью рукояток грубой и тонкой фокусировки добиться резкости изображения объекта.

3. Убрать из хода лучей нижнюю линзу конденсора (линзу большого поля) и фильтры.

4. Движением конденсора вверх-вниз добиться резкости изображения полевой диафрагмы осветителя.

5. С помощью винтов на конденсоре переместить изображение полевой диафрагмы в центр поля зрения.

6. Открыть полевую диафрагму до размера поля видения. Окрашенный препарат кладут на предметный столик микроскопа,

предназначенный для крепления препарата с помощью препаратодер-жателя и его фиксации в определенном положении. Благодаря препа-ратоводителю препарат перемещается в любом направлении.

а) 96% этанол;

б) 100% этанол;

в) 10% формалин;

г) смесь Никифорова;

д) метанол.

3. Качество окрашивания цитологических препаратов зависит от:

а) вида, состава, концентрации красителя;

б) продолжительности окрашивания;

в) времени изготовления препаратов;

г) рН среды;

д) температуры воздуха в процессе окрашивания;

е) всего вышеперечисленного.

4. Для цитохимических исследований используется фиксатор:

а) метанол;

б) этанол 70%;

в) формалин 10%;

г) специальные фиксаторы;

д) смесь Никифорова.

Модуль 6
Критерии цитологической диагностики

показано1из7

стр.

из7

Цитологический анализ включает: обработку присланного материала, приготовление препарата, окраску, микроскопию, трактовку цитологической картины, заключение, в котором дается оценка полученного материала, определяется характер процесса (доброкачественный или злокачественный), при возможности устанавливается нозологическая единица согласно принятым морфологическим классификациям.

Основной задачей указанного метода при исследовании различных органов является установление характера патологического процесса, а также доказательства существования рака при клиническом подозрении на патологию такого характера. Более того, задачей специалиста является достижение такого уровня знаний, когда возможно диагностировать тип опухоли с высокой степенью точности. Отрицательный результат цитологического исследования не исключает наличие рака. Существенную роль для правильного заключения играют быстрота получения, хорошая фиксация и окраска исследуемого материала. При описании результатов цитологического исследования препаратов необходимо использовать диагностические, а не количественные термины. По возможности следует указать тип опухоли. Иногда данные цитологического исследования позволяют только констатировать наличие злокачественного новообразования, а не определить тип опухолевых клеток. Однако даже такое заключение оказывается ценным для правильного ведения больного.

Поскольку методы лечения онкологических заболеваний могут быть весьма агрессивными, при отсутствии убедительных признаков опухоли необходим тщательный контроль в целях предотвращения гипердиагностики. Некоторые сложные спорные случаи требуют гистологического подтверждения диагноза. Следует изучать также и неполноценные препараты, но отрицательное заключение не должно категорически отрицать наличие опухоли.

Цитологическое исследование препаратов должно состоять из подробного описания морфологической картины и заключения, по возможности с указанием характера процесса (доброкачественный или злокачественный) при наличии опухоли, определении тканевой принадлежности, гистологической формы и степени дифференцировки

опухоли. Описание цитологической картины должно проводиться по одной схеме и включать осмотр при малом увеличении (обзор) и при иммерсии.

Основу цитологической диагностики составляет изучение клеток, изменения расположения, структуры, строения. В цитологической диагностике специалист, исследуя препараты под микроскопом, анализирует клеточный и неклеточный состав на основании известных ему критериев цитологической диагностики: количества клеток, присутствия клеток разного типа, их расположения в структурах и разрозненно, характера структур, размера и формы клеток и ядер, структуры ядра и цитоплазмы, ядерно-цитоплазматического соотношения, наличия или отсутствия клеточного и ядерного полиморфизма и других параметров клеток. О характере патологического процесса судят по степени выраженности отклонения от нормального клеточного состава. Учитывают при этом также фон препарата (элементы крови, бесструктурное вещество, коллоид, жир и пр.).

Количество клеток в мазке определяется прочностью межклеточных связей, обилием стромы. Богатый клеточный состав бывает в низкодифференцированных опухолях, гематосаркомах и других опухолях (низкодифференцированный рак, лимфосаркома, опухоль Юинга и др.). Единичные опухолевые клетки встречаются при осте-опластической (склеротической) остеогенной саркоме, фиброзирую-щем раке и других опухолях.

Расположение клеток, образование комплексов или структур является одним из важных диагностических признаков. Так, для рака характерно образование самых различных комплексов, наряду с разрозненно расположенными клетками. Наличие типичных железис-топодобных, тубулярных, папиллярных структур позволяет говорить об аденокарциноме. В опухолях мезенхимальной природы клеточные элементы располагаются преимущественно разрозненно, хотя могут быть синтициальные пласты и скопления без формирования определенных структур, тяжи клеток. В саркомах клетки располагаются иногда в виде пучков. Розеткоподобные структуры могут определяться в самых различных новообразованиях (опухоль Юинга, аденокар-цинома, хемодектома, синовиальная саркома и др.). Клетки в препаратах могут располагаться:

• Разрозненно.

• В скоплениях.

• В структурах.

Разрозненное расположение означает, что клетки лежат в препаратах поодиночке, отдельно друг от друга; расположение в скоплениях - клетки прилегают друг к другу, но достаточно свободно, не образуя структур; расположение в структурах - клетки связаны между собой в образования определенного вида:

• Пласты.

• Сотоподобные структуры (рис. 6.1).

• Палисадообразные структуры (клетки располагаются в виде полоски с «частоколом» ядер).

• Сосочкоподобные (папиллярные) структуры (клетки обволакивают друг друга).

• Железистоподобные структуры (структуры округлые, ядра расположены эксцентрически, в центре - секрет, бесструктурное вещество).

• Шаровидные структуры.

• Фолликулярные (фолликулоподобные) - клетки располагаются по периферии, в центре структуры - секрет.

• В виде розеток (однослойная структура, основная часть клеток образует круг, несколько клеток располагаются в центре).

Для доброкачественных поражений характерно правильное, упорядоченное расположение клеток, примерно одинаковое расстояние между ними, сходные размеры клеток и ядер, образующих структуру.

Для злокачественных новообразований характерны структуры, которые называются комплексами (встречаются при раке, опухоли из эпителиальной ткани) или пучками (встречаются при саркоме, опухоли из неэпителиальной ткани - соединительной, мышечной, нервной).

Клетки в комплексах нагромождаются друг на друга, отсутствует упорядоченность их расположения. В зависимости от морфологических особенностей комплексы могут быть:

• В виде пластов (рыхлое неупорядоченное расположение клеток):

- неопределенной формы (рис. 6.2);

- в виде «булыжной мостовой»;

- с образованием вдавлений (фасеток) на границах ядер соседних клеток.

• Сотоподобные.

• Палисадообразные.

• Сосочкоподобные (папиллярные).

• Железистоподобные.

• Шаровидные.

• Фолликулярные (фолликулоподобные).

• В виде розеток.

Пучки обычно состоят из клеток вытянутой формы, «разбегающихся» в разные стороны (рис. 6.3, 6.4).