Лимулиновый тест околоплодных вод

Окраска околоплодных вод акридиновым оранжевым. Лимулиновый тест околоплодных вод

Окраска мазков околоплодных вод по Граму

Окраска по Граму наиболее часто используется в качестве быстрого диагностического теста для обнаружения микроорганизмов в амниотической жидкости и широко применяется для определения тактики ведения беременных из группы высокого риска в отношении внутриутробного инфицирования.

Для того чтобы получить оптимальные результаты при выполнении этого теста, должны приниматься во внимание некоторые аспекты методики его выполнения. Препараты необходимо готовить непосредственно из жидкости, содержащейся в шприце, поскольку при использовании тампонов они будут абсорбировать воды и содержащиеся в них клетки, что может снижать вероятность обнаружения микроорганизмов в мазке или культуре.

Хотя центрифугирование амниотической жидкости при низкой скорости не влияет на возможность обнаружения бактерий при окраске по Граму, его использование все-таки повышает концентрацию микроорганизмов в осадке, что, вероятно, может способствовать их лучшей идентификации.

Чувствительность теста в среднем составляет 49,5% (196 из 396), специфичность - 97,5% (1388 из 1423), прогностическая значимость положительного результата теста - 79,4% (196 из 247) и отрицательного - 87,4% (1387 из 1587). Чувствительность достоверно повышается с увеличением концентрации микроорганизмов (>105 КОЕ/мл). Важно помнить, что микоплазменная инфекция, которая часто обнаруживается в околоплодных водах у пациенток с угрозой прерывания беременности на фоне целого плодного пузыря или с подтеканием околоплодных вод, не определяется при окраске по Граму.

Акридиновый оранжевый является метахроматическим красителем, который при низких значениях рН среды связывается с ДНК бактерий и окрашивает их в оранжевый цвет. Ядра эпителиальных клеток и клеток воспалительного ряда окрашиваются в цвета от зеленого до желтого, при этом цитоплазма остается неокрашенной (ни в оранжевый, ни в зеленый цвет). Таким образом, бактерии легко идентифицируются на темном фоне как яркие оранжевые структуры.

По мнению ряда авторов, окраска акридиновым оранжевым для обнаружения бактерий в биологических жидкостях является более чувствительной, чем по Граму. Однако по нашим данным окраска только этим красителем не может использоваться в качестве единственного теста, поскольку его чувствительность, специфичность и прогностическая значимость не превышают аналогичные показатели для окраски по Граму.

Потенциальное преимущество окрашивания с помощью акридинового оранжевого состоит в возможности обнаруживать микоплазмы, однако при решении вопроса, использовать ли только данный тест, должен быть тщательно рассмотрен тот факт, что может возрасти частота ложноотрицательных диагнозов.

Это быстрая, недорогая и чувствительная биологическая проба для обнаружения липополисахаридов бактерий. Она основана на коагуляционных свойствах лизата клеток крови (амебоцитов) мечехвоста (Limulus polyphemus) в присутствии эндотоксина.

При инфицировании околоплодных вод в них часто обнаруживаются грамотрицательные микроорганизмы. Их клеточная стенка содержат липополисахариды, которые могут быть обнаружены как при наличии живых бактерий, так и после их лизиса.

Окрашивание по Граму и лимулиновый тест имеют сравнимую точность для диагностики внутриутробной инфекции (с чувствительностью 69% и специфичностью 95%), а при их комбинированном использовании можно получить значительное увеличение чувствительности (с 69 до 96%) с небольшим снижением специфичности (с 95 до 86%). Хотя считается, что лимулиновый тест может обнаруживать только грам-отрицательные микроорганизмы, он также выявляет до 33% случаев инфицирования вод грам-положительной флорой, а также микоплазмами или кандидами.

Существует два объяснения данного явления. В этих случаях имевшиеся грамотрицательные возбудители инфекции могли быть не обнаружены при последующем культуральном исследовании из-за небольшого количества или из-за того, что они не попали в образец вод в живом виде. В последнем случае свободные липополисахариды, образовавшиеся при разрушении бактерий, могут обусловливать положительный лимулиновый тест, хотя их роста в культуре не будет. Согласно другому предположению взаимодействие с продуктами жизнедеятельности микроорганизмов может также обусловливать коагуляцию, выявляемую с помощью теста.

Так, например, пептидгликаны, как компонент грам-положительных бактерий, и маннит (представленный молекулами карбогидрата), который продуцируется грибами рода Candida, приводят к положительному лимулиновому тесту.