Лабораторная работа 3. Микробиологическое исследование объектов окружающей среды

Лабораторная работа 1.Влияние физико-химических и химических факторов на жизнедеятельность микроорганизмов

Задание 1.Изучение подъемной силы и осмоустойчивости дрожжей

Метод основан на определении скорости всплывания шарика теста, замешанного в строго определенных условиях. Быстротой подъема считают количество минут, прошедших со времени опускания шарика теста в воду до момента его всплывания. Под осмоустойчивостью понимают способность дрожжей не снижать ферментативную активность в среде с повышенным осмотическим давлением.

Примерные нормы осмочувствительности прессованных дрожжей в минутах

Хорошая осмочувствительность	1-10
Удовлетворительная осмочувствительность	10-20
Плохая осмочувствительность	свыше 20

Для работы взвешивают на технических весах две навески испытуемых дрожжей по 0,31 г каждая.

Первую навеску переносят их в фарфоровую чашку, приливают 4,8 мл 2,5 - % - ного раствора хлорида натрия температурой 35 ⁰С и тщательно перемешивают шпателем или пестиком. К полученной смеси добавляют 7 г муки, замешивают тесто и придают ему форму шарика. Шарик опускают в стакан с водой, нагретой до температуры 35⁰С, и помещают в термостат с той же температурой. Время, затраченное на всплывание шарика (вмин), умножают на коэффициент 3.5 и получают величину подъемной силы, получаемую стандартным способом.

Для определения осмоустойчивости проводят аналогичный опыт, замешивая шарик теста из второй навески дрожжей, 4.8 мл водопроводной воды, нагретой до 35°С, и 7 г муки. Полученный шарик опускают в стакан с водой, нагретой до температуры 35⁰С, и помещают в термостат с той же температурой. Рассчитывают величину подъемной силы в этом опыте и определяют осмоустойчивость дрожжей по разнице в подъемной силе дрожжей второго и первого опыта.

Задание 2. Влияние дезинфектантов на микроорганизмы.

В четыре пробирки помещают по 4 мл раствора отбеливателя с концентрациями 0.1%, 0.01%, 0.001% и 0.0001%, в контрольную пробирку – 4 мл дистиллированной воды. В каждую пробирку добавляют 0.1 мл исследуемой культуры, перемешивают и оставляют при комнатной температуре на 30 минут. После этого из каждой пробирки стерильной палочкой засеивают чашки Петри, заполненные МПА, и оставляют на несколько дней до появления видимых колоний. Результаты записывают в виде таблицы, описывая рост бактерий в каждой пробе.

Задание 3. Влияние температуры на жизнедеятельность бактерий и дрожжей

Дно чашки Петри,заполненную сусло-агаром или МПА делят на две части. Одну половину засеивают суспензией дрожжей или бактерий, которую выдерживали при комнатной температуре. Часть суспензии отбирают в стерильную пробирку и выдерживают 10 мин в кипящей водяной бане. Получившейся суспензией засеивают вторую половину чашки. Крышки прикрепляют липкой лентой и инкубирую дном вверх при комнатной температуре 7 суток. По окончании инкубирования оценивают результаты опыта.  

Лабораторная работа 2. Основные виды метаболических процессов

 

Задание 1. Масляно-кислое брожение

Масляно-кислое брожение исследуют на среде с картофелем. Сырой неочищенный картофель нарезают мелкими кубиками, заполняют ими 1/3 высокой пробирки, добавляют немного мела, заливают водопроводной водой на 2/3 и помещают на водяную баню при 80°С на 10 мин для пастеризации. Через два-три дня картофель всплывает вследствии бурно идущего газообразования. По окончании брожения культуральную жидкость используют для качественого определения продуктов брожения.

Опыт 1. В пробирку наливают 3-5 мл сброженной жидкости, добавляют 1-2 мл 5%-го хлорида железа и нагревают на пламени. Раствор масляно-кислого железа в отраженном свете приобретает буровато-коричневого окрашивание, а в проходящем – кроваво-красное.

Опыт 2. В пробирку к 3-5 мл культуральной жидкости прибавляют 0.5 мл 96% этилового спирта и 1-2 мл серной кислоты. При взбалтывании и нагревании появляется характерный ананасовый запах.

Задание 2. Молочнокислое брожение

Опыт 1. Определение кислотности молока.

Для титрования берут 10 мл хорошо перемешанного молока, помещают в плоскодонную колбу на 100 мл, добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1-2 капли фенолфталеина и титруют 0.1 Н раствором NaOH при постоянном взбалтывании до появления устойчивой слабо-розовой окраски. Если на поверхности прокисшего молока образовалась пленка, то ее сдвигают пипеткой или стеклянной палочкой в сторону, затем разбивают сгусток постукивая колбой о ладонь.

Кислотность молока выражают в градусах Тернея или процентах молочной кислоты. Так, 1°Т соответствуют 1 мл 0.1 Н раствора щелочи, пошедшей на титрование 100 мл. следовательно, если на титрование 10 мл молока пошло Х мл щелочи, то для выражения кислотности молока в градусах Тернея нужно значение Х умножить на 10.

Чтобы выразить кислотность в процентах молочной кислоты, количество 0.1 Н раствора NaOH, потраченное на титрование 100 мл молока, умножают на 0.009, так как 1 мл 0.1 Н NaOH нейтрализует эквивалентное количество молочной кислоты. Качественные реакции на молочную кислоту.

Опыт 2. Скисшее молоко отфильтровывают через бумажный складчатый фильтр. Фильтрат используют для проведения качественных реакций на молочную кислоту.

1. Перевод молочной кислоты в уксусный альдегид происходит в кислой среде при кипении в присутствии KMnO₄. Уксусный альдегид с аммиачным раствором серебра дает характерную реакцию серебряного зеркала.

В коническую колбу на 100 мл помещают 5 мл фильтрата, добавляют 2 мл серной кислоты и доводят до кипения. Затем продолжая кипячение и помешивание пипеткой, по каплям приливают 5 мл 5% KMnO₄, который обесцвечивается. Для распознавания уксусного альдегида покрывают горло колбы фильтровальной бумагой, смоченной аммиачным раствором нитрата серебра.

2. Реакция Уффельмана (проба с фенолом). В пробирку к 10 мл 5%-го р-ра фенола добавляем несколько капель 5%-го р-ра хлорида железа (III). Наблюдается образование интенсивно окрашенного синего раствора. Прибавление одной-двух капель фильтрата, содержащего молочную кислоту, делает раствор желтоватым.

 

Лабораторная работа 3. Микробиологическое исследование объектов окружающей среды