Техника посевов микроорганизмов

Посевы проводят как с целью выделения возбудителей из ис-

следуемого материала от больных, так и для получения чистых куль-

тур с целью последующего их изучения и идентификации. Техника

посевов в жидких и на плотные питательные среды имеет свои осо-

бенности.

В левую руку берут две пробирки. В одной находится питатель-

ная среда (плотная или жидкая), в другой – исследуемый материал.

Пробирки зажимают большим и указательным пальцами. Для того,

чтобы можно было наблюдать за содержанием пробирок, их держат

сверху кисти руки. Пробирки должны быть наклоненными, и нужно

следить, чтобы при открытии в них не попали посторонние микробы

или материал с окружающих предметов. Пробки из пробирок выни-

мают, держа их четвертым и пятым пальцами правой руки. Тремя

другими пальцами правой руки, как карандаш, держат бактериологи-

ческую петлю или пипетку, которыми распределяют исследуемый

материал.

Сначала стерилизуют (прокаливают) петлю в верхней части

пламени газовой горелки. Пробирки открывают, и край их проносят

через пламя горелки. Петлю опускают в пробирку, где есть исследу-

емый материал, и, осторожно касаясь стенки, охлаждают. В последу-

ющем петлю опускают в пробирку и набирают материал. Если он

находится в жидком состоянии, для посева достаточно капли жидко-

сти, которая задерживается в кильке бактериологической петли. Ко-

гда используют микробов, которые выросли на поверхности среды,

осторожно плавным движением набирают небольшое количество их,

следя, чтобы не повредить питательную среду. Петлю медленно вы-

нимают из пробирки, не касаясь ее стенок, и переносят в другую про-

бирку со средой. Штриховыми движениями от одной стенки пробир-

ки к другой, начиная с нижней части среды, проводят материал по

скошенной поверхности агара снизу вверх.

Петлю вынимают из пробирки, пробки и края пробирок проно-

сят через пламя и закрывают. Петлю стерилизуют в пламени, чтобы

уничтожить микроорганизмы.

При посеве материала на жидкую питательную среду петлю с

материалом окунают в жидкость. Если он не снимается из петли, его

осторожно растирают на стенке пробирки и омывают средой.

Материал, который набирали пастеровской или градуированной

пипеткой, выливают в питательную среду, а для равномерного рас-

пространения его пробирку осторожно, чтобы не замочить пробку,

стряхивают или вращают, зажав в ладонях.

Посев тампоном

При посеве тампоном чашку открывают одной рукой, тампоном

касаются поверхности агара возле края чашки и начинают проводить

посев штрихами от края к краю чашки, втирая осторожно материал в

поверхность среды, не повреждая его, постепенно вращая тампон.

После проведения посева чашку вращают на 90° и повторяют посев

перпендикулярно к предыдущему.

При посеве уколом в столбик питательной среды пробирку

с мясо-пептонним агаром, желатином и т.п. берут в левую руку, пет-

лю с материалом – в правую и делают укол к дну пробирки в среду.

Петлю осторожно вынимают, а пробирку закрывают.

Посев материала в толщу питательной среды

Перед посевом материал должен быть в жидком состоянии.

Стерильной градуированной пипеткой набирают 0,1, 0,5 или

1,0 мл материала и выливают его в стерильные чашки Петри. После

этого материал заливают 15−20 мл растопленного и охлажденного до

45−50 °С МПА. Осторожно покачивая чашку, круговыми движения-

ми по поверхности стола перемешивают в ней материал, достигая его

равномерного деления в среде. Чашку оставляют закрытой до полно-

го застывания агара, а затем переворачивают вверх дном.

Для того, чтобы выделить чистую культуру микроорганизмов,

следует отделить многочисленные бактерии, которые находятся в ма-

териале, одна от другой. Это можно достичь с помощью методов,

которые основаны на двух принципах – механическом и биологиче-

ском разобщении бактерий.

Методы выделения чистых культур,