Дифференциальное окрашивание хромосом

     Современные цитогенетические ме­тодики позволяют идентифицировать по морфологии все пары хромосом на препарате. Суть этих ме­тодик состоит в дифференциальном окрашивании хромосом по длине, что обеспечивается сравнитель­но простыми температурно-солевыми воздействиями на фиксированные хромосомы или использованием спе­цифических красителей. Дифференциальное окрашивание при­водит к появлению линейного рисунка по длине хромосомы.

Несмотря на большое разнообразие способов обработки хромосомных пре­паратов и красителей, выявляемый ли­нейный рисунок хромосомы всегда один и тот же. Он меняется только в зависимости от степени конденсиро­ванного состояния хромосомы. Сегмент, види­мый как одна полоса в метафазной хромосоме, в менее конденсированной прометафазной хромосоме, может предстать в виде нескольких мелких полос.
Дифференциальное окрашивание в зависимости от используемого метода может охватывать либо всю длину хро­мосомы, либо ее центромерный район.
Представление о рисунке диффе­ренциально окрашенных по всей дли­не хромосом можно получить, окраши­вая препараты по G-методу с исполь­зованием красителя Гимзы (рис. 5). В этом случае хромосомы выглядят состоя­щими из поперечно-исчерченных, по-разному окрашенных сегментов. Каж­дой паре хромосом присущ индивиду­альный рисунок исчерченности за счет неодинаковых размеров сегментов. В мелких хромосомах рисунок образует­ся единичными сегментами, в крупных хромосомах сегментов много. Общее для нормального хромосомного набо­ра число окрашенных и неокрашенных сегментов в метафазе составляет около 400. В прометафазных хромосомах оно увеличивается до 850 и более.

Рис. 5. Схематическое изображение хромосом человека при G-окрашивании в соответствии с международной классификацией

 Метод флюоресцентной гибридизации in situ.

Успехи молекулярной цитогенетики человека позволили разработать новые методы изучения хромосом. Одним из них является метод флюоресцентной гибридизации in situ (FISH). Это метод основан на комплементарном взаимодействии ДНК изучаемого объекта с небольшой искусственной последовательностью нуклеотидов ДНК, называемой ДНК-зондом. ДНК-зонд соединен с флюоресцирующим веществом. Комплементарное взаимодействие ДНК изучаемого объекта и ДНК-зонда называется гибридизацией ДНК. Если гибридизация происходит, то это событие фиксируется люминесцентным микроскопом и свидетельствует о наличии в исследуемом образце фрагмента ДНК, комплементарного ДНК-зонду. С помощью этого метода, имея набор разных ДНК-зондов, можно даже в неделящейся клетке выявить аномалию числа хромосом и наличие патологического гена, а также выявить мелкие хромосомные мутации, которые трудно обнаружить обычными способами. При этом разные хромосомы или их участки выглядят как разноцветные структуры (рис. 6, 7).

Рис. 6. Нормальная женская кариограмма человека, полученная при использовании методики спектрального кариотипирования.

Рис. 7. Кариограмма мужчины с переносом участка 1-й хромосомы на 3-ю и потерей участка 9-й хромосомы.