Оформление лабораторной тетради

 Записать классификацию питательных сред; зарисовать таб. 5; зарисовать рис. 5; зарисовать схему выделения чистой культуры микроорганизмов по этапам; записать ход исследования по выделению чистой культуры (1-й день), зарисовать мазок.

 

ЗАНЯТИЕ № 6

Тема: ФИЗИОЛОГИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ. ФЕРМЕНТЫ БАКТЕРИЙ. АНТИМИКРОБНОЕ ДЕЙСТВИЕ ФИЗИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ. МЕТОДЫ СТЕРИЛИЗАЦИИ.

Цель занятия: изучить сахаролитические и протеолитические свойства микробов, познакомиться с методами стерилизации, охарактеризовать ее условия, аппаратуру, режим, используемый материал, изучить результаты первого дня выделения чистой культуры аэробов и продолжить ее выделение (2-й день).

План занятий.

1. Основные группы ферментов бактерий. Значение ферментов для жизнедеятельности бактерий и идентификации видов.

2. Идентификация бактериальной культуры: а) по культуральным признакам; б) по биохимическим свойствам.

3. Методы определения ферментов микроорганизмов.

4. Стерилизация. Методы стерилизации.

5. Определение эффективности стерилизации.

6. Выделение чистой культуры микроорганизмов (продолжение).

 

Задания для выполнения лабораторной работы.

1. Учесть результаты первого дня выделения чистой культуры микроорганизмов и продолжить ее выделение (2-й день): а) описать морфологию колоний на чашках с МПА (таб. 6); б) отобрать изолированные колонии; в) из части колоний сделать мазки, окрасить по Граму; г) пересеять исследуемую колонию на скошенный агар.

Таблица 6

Схема изучения колоний

№	Признак	Возможные характеристики колоний
1.	Форма	Плоская, выпуклая, куполообразная, вдавленная, круглая, розеткообразная, звездчатая
2.	Величина, мм	Крупные (4-5 мм), средние (2-4 мм), мелкие (1-2 мм), карликовые (< 1 мм)
3.	Характер поверхности	Гладкая (S-форма), шероховатая (R-форма), исчерченная, бугристая, матовая, блестящая
4.	Цвет	Бесцветные, окрашенные
5.	Прозрачность	Прозрачные, непрозрачные, полупрозрачные
6.	Характер краев	Ровные, зазубренные, бахромчатые, волокнистые, фестончатые
7.	Внутренняя структура	Гомогенная, зернистая, неоднородная
8.	Консистенция	Вязкая, слизистая, крошковидная
9.	Эмульгирование в капле воды	Хорошо, плохо

Примечание: 5-7 пункты изучаются при малом увеличении микроскопа.

2. Изучить сахаролитические и протеолитические ферменты кишечной группы при посеве на «пестрый» ряд и мясо-пептонный бульон.

       Определение сахаролитических свойств микробов проводят путем посева на питательные среды, содержащие сахара, многоатомные спирты и индикатор. Под действием образующейся при разложении углевода кислоты индикатор изменяет окраску среды, появляются пузырьки газа. Сахаролитические свойства изучают и на таких средах, как среды Эндо, Левина, Плоскирева. В состав этих сред входит молочный сахар – лактоза, и если микроорганизм разлагает его, то цвет колоний изменяется соответственно индикатору, входящему в состав среды.

       Определение протеолитических свойств микробов проводят на средах с желатином, молоком, сывороткой, пептоном. При посеве уколом в столбик желатиновой среды микробы, разлагающие желатин, разжижают среду. Действие микроорганизмов, разлагающих казеин, проявляется в пептонизации молока, которое приобретает вид молочной сыворотки.

       В процессе ферментации пептонов микроорганизмы образуют индол (С₈Н₇N), сероводород (Н₂S), аммиак (NH₃) и другие соединения. Для их обнаружения используют лакмусовую бумагу. При наличии сероводорода, фильтровальная бумага, пропитанная раствором уксуснокислого свинца, чернеет. Для выявления индола используют индикаторную бумагу, пропитанную раствором щавелевой кислоты. В присутствии индола бумага краснеет. Аммиак определяют при помощи увлажненной красной лакмусовой бумаги. В присутствии аммиака бумага синеет.

       В бактериологической практике иногда ограничиваются изучением сахаролитических и протеолитических свойств исследуемых бактерий, если этого достаточно для их идентификации. При необходимости исследуют другие признаки, например способность восстанавливать нитраты, карбоксилировать аминокилоты, образовывать оксидазу, плазмокоагулазу, фибринолизин и другие ферменты.    

3. Результаты работы по идентификации выделенной культуры записать в таб. 7.

Таблица 7

Характеристика культуры по морфологическим и физиологическим признакам

 (форма протокола)

Морфология

Окраска по методу Грама

Характер роста

Биохимические свойства

Наименование рода и вида

к о л о н и й

н а   б у л ь о н е

н а   а г а р е

ферментация

Обра-зова-ние

г л ю к о з ы

л а к т о з ы

с а х а р о з ы

м а л ь т о з ы

м а н н и т а

и н д о л а

к а т а л а з ы

Примечание: Ферментация углеводов может происходить до кислоты (К+) или кислоты и газа (К+Г+).

4. Записать классификацию ферментов микроорганизмов.

    Классификация ферментов: а) по характеру вызываемых превращений: гидролазы, оксидоредуктазы, трансферазы, лиазы, изомеразы, лигазы; б) по месту локализации: эндо- и экзоферменты; в) конструктивные, индуцибельные ферменты; г) ферменты агрессии.

       Микробиологические ферменты широко используются в медицине и промышленности. Так, получаемые из Aspergillus niger кислотоустойчивая амилаза и протеаза применяются как лекарственные средства, способствующие пищеварению. Для заживления ран и ожогов могут применяться стрептокиназа (из Streptococcus spheroides) и коллагеназа (из Clostridium hystolyticum).

       Ферменты бактерий, обладая высокой специфичностью, используются при идентификации и определении видов микроорганизмов. Наибольшее значение имеет определение сахаролитических и протеолитических свойств.

5. Записать методы стерилизации и охарактеризовать ее условия и полноту, аппаратуру, режим, используемый материал в таб.8.

Таблица 8

Основные методы стерилизации

Метод стерилизации	Аппарат	Режим стерилизации (время, t°С, давление, кратность)	Надежность (что остается)	Стерилизуемые материалы

 

Вопросы для обсуждения.

1. Классификация ферментов бактерий по месту действия, по времени образования, биохимическим свойствам, по расщеплению различных веществ. 2. Роль ферментов для жизнедеятельности бактерий.                    3. Идентификация микроорганизмов по культуральным свойствам.                4. Идентификация микроорганизмов по биохимическим свойствам.           5. Определение сахаролитической активности микробов. 6. Определение протеолитической активности микробов. 7. Принципы стерилизации.       8. Аппаратура используемая для стерилизации. 9. Методы стерилизации микробиологического инструментария. 10. Методы стерилизации питательных сред. 11. Определение эффективности стерилизации.