Вопросы аналитической токсикологии

1) Методология проведения клинико-токсикологического анализа:

 

Изолирование аминазина рекомендуется производить спиртом, подкисленным до рН 2,0-3,0 10% раствором щавелевой кислоты, с последующей экстракцией основания эфиром при рН 13,0 и реэкстракцией вещества в 0,5 н раствор серной кислоты (изолирование по Е.М. Саломатину).

Также изолирование можно проводить путем экстракции из биологического материала подкисленной водой, с последующей экстракцией органическим растворителем (диэтиловый эфир, хлороформ) из этого раствора, подщелоченного с помощью 25% раствора аммиака.

 

o Отбор проб биоматериала у живых лиц или извлечение органов и тканей из трупа:

Выделение аминазина из крови. В колбу вместимостью 100 мл, снабженную обратным холодильником, вносят 5—10 мл крови и прибавляют 30—50 мл этилового спирта, подкисленного 10 %-м спиртовым раствором щавелевой кислоты до рН = 2...3. Колбу нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин, а затем охлаждают. Спиртовую вытяжку сливают и выпаривают на водяной бане досуха. К сухому остатку прибавляют 50 мл воды, нагретой до 40—60 °С, и взбалтывают. После охлаждения раствора до комнатной температуры его фильтруют, собирая фильтрат в делительную воронку, в которую дважды прибавляют по 20 мл диэтилового эфира, и взбалтывают по 5—10 мин, а затем отделяют эфирный слой. Оставшуюся в делительной воронке кислую водную фазу подщелачивают 50 %-м раствором гидроксида натрия до рН= 13 и взбалтывают с 3—4 порциями диэтилового эфира (по 10 мл). Эфирные вытяжки соединяют и исследуют на наличие аминазина.

Выделение аминазина из мочи. В колбу вносят 50—200 мл мочи, подкисляют 25 %-м раствором серной кислоты до рН = 2...3, нагревают на кипящей водяной бане в течение 5 мин, а затем охлаждают до комнатной температуры. Эту жидкость переносят в делительную воронку и взбалтывают в течение 5—10 мин с двумя новыми порциями диэтилового эфира по 50 мл. Оставшуюся в делительной воронке кислую водную фазу исследуют на наличие аминазина, как указано при описании способа выделения этого препарата из биологического материала.

 

o изолирование ксенобиотика:

Выделение аминазина из биологического материала (по Ε. Μ. Саломатину). 100 г измельченного биологического материала трижды настаивают по 2 ч с этиловым спиртом, подкисленным 10 %-м спиртовым раствором щавелевой кислоты до рН = 2...3. Соединенные кислые спиртовые вытяжки на водяной бане (при 40 °С) упаривают до густоты сиропа. Примеси, содержащиеся в сиропообразных остатках, осаждают 96 ° этиловым спиртом и фильтруют. Затем, спиртовые вытяжки выпаривают досуха. Сухой остаток растворяют в 100 мл воды, нагретой до 40—60 °С. Жидкость охлаждают и фильтруют. Фильтрат переносят в делительную воронку, доводят 5 %-м раствором щавелевой кислоты до рН = 2...3 и дважды взбалтывают с диэтиловым эфиром (по 50 мл). Водную фазу подщелачивают 50 %-м раствором гидроксида натрия до рН= 13 и взбалтывают с 3—4 новыми порциями диэтилового эфира по 5 мин (объем прибавляемого диэтилового эфира для каждой экстракции должен составлять третью часть объема водной фазы). Объединенные эфирные вытяжки взбалтывают с 0,5 н. раствором серной кислоты (по 10, 10, 10, 5 и 5 мл) в течение 5 мин.

 

Кислые водные вытяжки соединяют и нагревают 3 мин на водяной бане, нагретой до 50—60 °С, для удаления диэтилового эфира. Освобожденные от диэтилового эфира кислые водные вытяжки используют для обнаружения аминазина.

 

2) Методы идентификации:

Предварительные пробы на наличие аминазина в моче.

 

1. К 1 мл мочи прибавляют 1 мл реактива, состоящего из 80 мл 10 %-го раствора серной кислоты и 20 мл 5 %-го раствора хлорида железа (III). При наличии аминазина и других производных фенотиазина в моче раствор приобретает розовато-лиловую окраску.

 

2. К 1 мл мочи прибавляют 1 мл реактива ФПН. Появление розовой окраски указывает на наличие аминазина или других производных фенотиазина в моче.

 

Приготовление реактива ФНП:

Реактив ФПН. К 5 мл 5 %-го раствора хлорида железа (III) прибавляют 45 мл 20 %-го раствора хлорной кислоты и 50 мл 50 %-го раствора азотной кислоты.

 

Обнаружение аминазина:

 

Реакция с концентрированной серной кислотой. Аминазин с концентрированной серной кислотой дает пурпурно-красную окраску.

 

Реакция с концентрированной азотной кислотой. При взаимодействии аминазина с концентрированной азотной кислотой возникает пурпурно-фиолетовая окраска.

 

Реакция с концентрированной соляной кислотой. Аминазин с концентрированной соляной кислотой дает розовато-фиолетовую, переходящую в красно-фиолетовую окраску.

 

Реакция с реактивом Марки. Аминазин под влиянием реактива Марки приобретает пурпурную окраску.

 

Реакция с реактивом Манделина. Аминазин с этим реактивом дает зеленую окраску, переходящую в пурпурную.

 

Обнаружение аминазина методом хроматографии. На хроматографическую пластинку наносят исследуемый раствор и раствор «свидетель» (спиртовой раствор аминазина). Пластинку подсушивают на воздухе, а затем вносят в камеру для хроматографирования, насыщенную парами системы растворителей (смесь бензола, диоксана и аммиака 75: 20:5). После того как жидкость поднимется на 13 см выше линии старта, пластинку вынимают из камеры высушивают на воздухе и опрыскивают реактивом Марки или свежеприготовленной смесью концентрированной азотной кислоты и этилового спирта (1:9). При наличии аминазина пятна на пластинке приобретают розово-фиолетовую окраску.

 

3) Методы количественного определения:

 

Обнаружение аминазина по УФ- и ИК-спектрам. Например, раствор тизерцина в этиловом спирте имеет максимумы поглощения при длине волны 255 и 310 нм, а аминазин при 254-255 нм. Основной метаболит — сульфоксидное производное фенотиазина имеет максимумы поглощения при длине волны 238-240, 273, 298 и 340 нм. Тизерцин в растворе 0,1 н. соляной кислоты имеет максимум в области 251 и 302 нм. Дипразин, растворенный в 0,01 н. растворе соляной кислоты, имеет максимумы поглощения при 249 и 300 нм; растворенный в смеси воды и этилового спирта (1:1) — 252 и 301 нм. В ИК-области спектра основание тизерцина (диск с бромидом калия) имеет основные пики при 1587, 1460, 1269 и 1446 см-1; дипразин имеет пики при 1459, 1222 и 757 см-1.

 

Приготовление хроматографических пластинок:

На пластинку (6,5 x 18 см) наносят суспензию, состоящую из 3,05 г силикагеля, 0,18 г медицинского гипса и 8 мл воды. Суспензию равномерно распределяют на пластинке, которую высушивают на воздухе.

 

Спектрофотометрический метод основан на количественной оценке поглощения растворов препаратов в ультрафиолетовой области. Ультрафиолетовый спектр снимается в диапазоне длин волн 220-400 нм на СФ-4, СФ-4а и др. при концентрации 10 мкг/мл в пересчете на основание.

По этим методикам обнаруживается 53-60% препарата, добавленного к органам. Граница обнаружения 0,2 мг, граница определения 0,5 мг препарата в 100 г органов.

 

Фотоколориметрический метод определения основан на реакции с концентрированной серной кислотой. Фотометрирование проводят при?=508 нм в кювете 5,105; эталон сравнения — контроль реактивов. Расчет содержания препаратов производится по калибровочному графику.

 

 

Список литературы

 

1. Беспалов А.Ю., Звартау Э.Э. // Нейропсихофармакология антагонистов NMDA-рецепторов. – Санкт-Петербург.: Невский диалект. – 2000. – 295 с.

2. Головко А.И., Коноплин Д.А., Некрасов А.Н. и др. // Нейрохимия. – 2000. – Т.17. – №1. – С.3–12.

3. Долматова Л.С., Иванец Т.А.. // Вопр.наркол. – 1993. – №3. – С.38–41.

4. Егоров В.Ф., Кошкина Е.А., Гречаная Т.Б.. // Вопр.наркол. – 1996. – №2. – С.67–73.

5. Еремин С.К., Изотов Б.Н., Веселовская Н.В. // Анализ наркотических средств. – М.: Мысль. – 1993. – 259 с.

6. Катюхин В.Н., Кондакова Е.В. // Клин.мед. – 1999. – Т.77. – №7. – С.36–39.

7. Козловский А.В., Лелевич В.В., Виницкая А.Г. и др. // Вопр.наркол. – 1999. – №1. – С.79–84.

8. Крылов Б.В., Дербенёв А.В., Подзорова С.А. и др. // Росс.физиолог.ж. – 1999. – Т.85. – №2. – С.225–236.

9. Кудрин А.Н. // Фармакология. – М.: Медицина. – 1991. – 495 с.

10. Лоуренс Д.Р., Бенитт П.Н. // Клиническая фармакология. – М.: Меди-цина. – 1993. – Т.2. – 669 с.

11. Оленко Е.С., Скворцов Ю.И., Панченко Л.Ф. // Вопр.наркол. – 2001. – №2. – С.65–75.

12. Панченко Л.Ф., Пирожков С.В., Немоловский Т.Н. и др. // Вопр.наркол. – 1998. – №1. – С.50–53.

13. Соловьева А.Г. Изменение обмена липидов и перекисное окисление липидов при острой и хронической интоксикации морфином и промедолом: Автореф. дисс….канд.биол.наук. – М. – 1995. – 20 с.

14. Akil H., Owens G., Gutstein H. et al. // Drug Alcohol Depend. – 1998. – V.51. – P.127–140.

15. Brodsky M.,Elliott K., Hyansky A., Inturrisi C.E. // Brain Res. Bull. – 1995. ––V.38. – P.135–141.

16. Donaldson L.F., Hanley M.R., Villiablanca A.C. // Trends Pharmacol. Sci. – 1997. – V.18. – P.171–181.

17. Henfelder A.E., Bahn R.S. // Clin.exp.Immunol. – 1993. – V.92. – P.296–299.

18. Lee A.Y.-S. // Int.J.Cardiology. – 1990. – V.27. – P.145–151.

19. Martin S., Manzanares J., Corchero J. et al. // Brain Res. – 1999. – V. 821. – P.350–355.

20. Marshall F.H., Barnes J., Hughes G.N. et al. // J.Neurochem. – 1991. – V.56. – P.917–926.

21. Nahas G., Frick H.C. // Neurotoxicology. – 1986. – V.7. – P.381–396.

22. Nie X., Zongyao W., Lixin H. et al. // Biorheology. – 1999. – V.36. – P.37–40.

23. Oster A.G. // Med.J.Aust. – 1977. – V.1. – P.497–499.

24. Ramkumar V., El-Fakahang E.E. // Eur.J.Pharmacol. – 1988. – V.146. – P.73–83.

25. Recommended methods for testing opium \ crude morphine. – New York, United Nations. – 1987. – 23 p.

26. Self D.W., Terwilliger R.L., Nestler E.J., Stein L. // J.Neurosci. – 1994. – V.14. – P.6239–6247.

27. Singh V.K., Bajpai K., Biswas S. et al. // Neuroimmunomodulation. – 1997. – V.4. – P.285–297.

28. Terwilliger R.L., Beitner – Johnson D., Sevarino K.A. et al. // Brain Res. – 1991. – V.548. – P.100–110.

29. Zetterman R.K., Sorvell M.F. // Gastroenterology. – 1981. – V.81. – P.616–624.

30. Wilson J., Little H.J. // Pharmacol. Biochem.Behav. – 1998. – V.59. – P.967–973.