2020-01-14
80
Эти препараты представляют собой стерильные очищенные фильтраты фаголизатов соответствующих видов бактерий. Они освобождены от продуктов жизнедеятельности бактерий, эндо- и экзотоксинов, продуктов фаголизиса бактериальных клеток, белковых и антигенных комплексов питательных сред. Благодаря строгой специфичности действия бактериофаги, в отличие от антибиотиков, не угнетают нормальную микрофлору макроорганизма, не подавляют его механизмы иммунной защиты и не обладают токсическим действием. На литическую активность бактериофагов не влияет наличие резистентности бактерий к антибиотикам. Производственные штаммы бактерий — продуценты бактериофагов, которые выделяют от больных гнойно-септическими или кишечными инфекциями. Производственные штаммы бактерий должны обладать типичными для каждого вида морфологическими, культуральными, биохимическими и серологическими свойствами, не продуцировать энтеротоксины и не содержать умеренных бактериофагов. Оценку наличия индуцируемых профагов проводят путем обработки бактерий индукторами (ультрафиолетовым излучением, митомицином C, налидиксовой кислотой) с последующим контролем появления бляшек лизиса, вызванного активацией умеренных бактериофагов, содержащихся в геноме бактерии. Производственные штаммы бактерий должны лизироваться маточными фагами в титрах по методу Аппельмана не менее чем на 1 — 2 порядка выше показателей специфической активности конечного продукта. При этом стабильность лизиса должна сохраняться после 48 часов инкубирования при температуре 37 °C. Для получения фаговых препаратов используются только вирулентные бактериофаги. Их выделяют из природных источников — клинического материала, сточных вод, почвы, пассируя на штаммах целевых видов бактерий — свежевыделенных и производственных. Подбирают высокоактивные расы (штаммы) фагов к слаболизирующимся и фагорезистентным штаммам бактерий. Пополнение производственных фаговых рас различными штаммами из природных источников позволяет преодолевать первичную фагоустойчивость возбудителей. Маточные бактериофаги должны включать вирулентные фаги с широким диапазоном действия по отношению к штаммам соответствующего вида бактерий, обладать высокой активностью, стабильностью лизиса, специфической направленностью антимикробного действия и высокой урожайностью Производственный процесс включает в себя: работу с бактериальными возбудителями гнойно-септических и кишечных инфекций, подбор к ним вирулентных штаммов бактериофагов, отбор бактерий — продуцентов бактериофагов, получение маточных бактериофагов, культивирование производственных штаммов бактерий — продуцентов и маточных бактериофагов с целью получения биомассы бактериофагов и приготовление препаратов бактериофагов. Освобождение фаголизитов от продуктов жизнедеятельности бактерий, эндо- и экзотоксинов, продуктов фаголизиса бактериальных клеток должно быть обеспечено дополнительными методами очистки (ультрафильтрацией, афинной хроматографией и т.д.). После завершения процесса фаголизиса бактериальной взвеси осуществляется стерилизующая фильтрация фаголизатов, затем очищение от бактериальных метаболитов и токсинов, компонентов питательной среды, далее фаголизаты подвергаются концентрированию, полученные концентраты стерилизуются.
|
|
|
|
|
|
После концентрирования из фаголизатов готовят:
· жидкие препараты, которые доводятся до финального титра буферными растворами pH 6,0 — 8,0, стерилизуют и разливают в стерильные флаконы, укупориваются герметично и стерильно;
· лиофилизированную биомассу, используемую для получения таблеток, суппозиториев, мазей, линиментов и др.
В процессе производства бактериофагов на разных этапах получают промежуточные продукты, которые должны соответствовать определенному уровню качества. При подготовке производственных штаммов бактерий контроль посевных культур бактериальных штаммов-продуцентов включает в себя следующие показатели:
· чистота;
· типичность биологических свойств;
· отсутствие легко индуцируемых профагов.
· При подготовке маточных бактериофагов контроль маточных бактериофагов включает в себя следующие показатели:
· содержание фаговых частиц в 1 мл, определяемое методом агаровых слоев по Грациа;
· специфическая активность, определяемая титрованием в жидкой питательной среде по методу Аппельмана на посевных бактериальных штаммах;
· стабильность лизиса (сохранность полученных результатов лизиса по методу Аппельмана) в течение 48 часов инкубации при температуре 37 ± 1 °C. Температурный режим и время инкубации зависят от специфических особенностей бактерий и их фагов;
· стерильность.
По мере завершения очистки фаголизатов, концентрирования, стерилизующей фильтрации проводится определение показателей pH, стерильности, специфической активности по методу Аппельмана.
Для получения жидкого препарата после финальной стадии бактериофаг разливают по флаконам и укупоривают.
31. --------------------------
