2020-01-14
248
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИБИОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫРОСШИХ НА ТВЕРДЫХ СРЕДАХ
Большинство методов определения антибиотической активности связано с культивированием изучаемого организма на авизированных средах. Здесь мы остановимся лишь на наиболее распространенных методах выявления антибиотических свойств микробов.
Метод перпендикулярных штрихов. Испытуемый организм высевается штрихом (полоской) на поверхность агаровой пластинки чашки Петри. После того как микроорганизм разовьется, перпендикулярно его штриху подсеваются различные тест-организмы. Чашки помещаются в термостат на 20—24 ч. Если изучаемый организм оказывает антимикробное действие в отношении ряда тест-микробов, то последние будут расти вдали от штриха антагониста. Нечувствительные микробы будут развиваться в непосредственной близости от штриха изучаемого организма.
Метод штриха широко используется в практике поиска продуцентов антибиотических веществ, однако он имеет один существенный недостаток.
|
|
|
При методе штриха используется одна и та же среда для культивирования изучаемого организма и для роста тест-микробов.
Например, если для образования антибиотика необходима среда с нитратным источником азота, то такая среда может быть совершенно непригодной для развития ряда тест-организмов. И наоборот, многие тест-организмы хорошо растут на среде, состоящей из бульона Хоттингера (эта среда довольно часто применяется), но не все организмы могут продуцировать антибиотик на этой среде. Б этом случае можно не определить антибиотическую активность организма, хотя он и обладает этой способностью.
Метод агаровых блочков. Изучаемый организм высевают сплошным «газоном» иа поверхность агаровой пластинки в чашке Петри. Среда используется такая, которая благоприятна не только для роста организма, но, самое главное, для образования им антибиотика. Иногда целесообразно высевать организм на разные по составу среды.
После того как организм хорошо вырастет, пробочным сверлом (диаметр примерно 8 мм) вырезают агаровые блочки, которые переносят на поверхность другой агаровой пластинки, предварительно засеянной одним тест-организмом. На одну чашку Петри можно разместить 5—7 агаровых блочков.
Чашки с агаровыми блочками помещают в термостат на 20— 24 ч при температуре, благоприятной для развития тест-организма. Если выделяемый организмом антибиотик подавляет развитие тест-микроба, то вокруг агарового блочка образуется зона отсутствия роста. Чем больше выделяется антибиотика или чем активнее образуемое антибиотическое вещество, тем больше будет диаметр зоны отсутствия роста тест-микроба.
|
|
|
Метод высева антагониста на одной половине агаровой пластинки с последующим подсевом тсст-микробов штрихами на другой половине агаровой пластинки. Чашка Петри разделяется стеклянной перегородкой пополам. В одну половину наливают питательный агар, благоприятный для развития изучаемого организма и образования антибиотика; другая половина чашки остается свободной. Иногда поступают иначе. В чашку Петри (без перегородки) наливают питательный агар, затем, когда агар застынет, стерильным скальпелем удаляют одну половину агаровой пластинки.
На половину агаровой пластинки высевают сплошным «газоном» изучаемый организм, и засеянные чашки помещают в термостат для получения хорошего развития микроба. После этого на оставшуюся свободную часть пластинки в чашке наливают расплавленный питательный агар, пригодный для развития тест-организмов, которые высевают штрихами, перпендикулярными границе развития антагониста. Чашки вновь помещают в термостат на 20—24 ч при температуре, благоприятной для развития тест-организмов.
Чувствительные тест-микробы будут расти на определенном расстоянии от антагониста, устойчивые же формы развиваются на протяжении всего штриха
ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИБИОТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ ПРИ КУЛЬТИВИРОВАНИИ ИХ В ЖИДКИХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕДАХ
При определении антибиотических свойств микроорганизмов, культивируемых в жидких средах, необходимо иметь в виду, что некоторые антибиотики в процессе развития микробов накапливаются внутри клеток продуцента, практически не выделяясь в окружающую среду. Поэтому определение антибиотических свойств организмов следует проводить как в культуральной жидкости, так и в экстрактах. Обычно для экстракции антибиотика из клеток продуцента применяют органические растворители (этиловый слирт, подкисленный этиловый спирт, ацетон и другие вещества).
Для оценки антибиотических свойств микроорганизмов, выросших в жидких средах, можно использовать метод последовательных разведений и метод бумажных дисков.
Метод бумажных дисков. На агаровую пластинку в чашке Петри высевают соответствующий тест-организм. Затем чашки с засеянным тест-микробом подсушивают в термостате при 37°С в течение 15'—20 мин. На одной чашке, т. е. в отношении одного тест-организма, может быть испытано одновременно 6—7 культуральных жидкостей.
Диски из фильтровальной бумаги диаметром 8 мм заготавливают впрок, стерилизуют в автоклаве под давлением выше нормального на одну атмосферу в течение 20—30 мин.
Стерильный диск фильтровальной бумаги захватывают стерильным пинцетом и смачивают в испытуемой культуральной жидкости, затем накладывают на поверхность питательного агара, засеянного тест-микробом. Чашку с тест-организмом и бумажными дисками помещают в термостат при температуре, оптимальной для роста тест-организма, на 24 ч, если это бактериальные формы тест-микроба, и на 48—72 ч для грибных или дрожжеподобных форм.
При наличии антибиотического вещества в испытуемой культуральной жидкости вокруг диска образуется зона задержки роста тест-микроба.
Приведенные методы пригодны для определения антибиотической' активности микроорганизмов только в отношении бактерий, актиномицетов, дрожжевых и дрожжеподобных организмов и грибов. Для выяснения антивирусного или антиопухолевого действия организмов в силу специфичности этих объектов используют другие методы.
