Осаждение белков органическими растворителями

Добавление смешивающих с водой нейтральных органических растворителей,например этанола, ацетона, хлороформа, уменьшает растворимость большинства белков в воде и вызывает выпадение их в осадок. Органические растворители снижают диэлектрическую постоянную белковых растворов, вследствие чего усиливается притяжение между белковыми частицами, способствующее агрегации белков и снижению их растворимости. Кроме того органические растворители нарушают гидрофобные взаимодействия внутри белковой молекулы.

Кратковременное воздействие на белки органическими растворителями при низких температурах вызывает их обратимое осаждение. Однако длительное воздействие высоких концентраций органических растворителей при относительно высоких температурах (+20°и выше) приводит к денатурации белков, необратимому осаждению. Выпадает белок в осадок.

Денатурация белков при нагревании

Белки подвергаются денатурации и выпадают в осадок при нагревании их растворов до температуры выше 50-60°С. Свернувшиеся белки не могут быть снова переведены в раствор, так как при нагревании нарушаются связи, стабилизирующие четвертичную, третичную и вторичную структуры белковых молекул, изменяются их физико-химические свойства, в том числе уменьшается их способность к гидратации.

В изоионном состоянии при нагревании увеличивается степень денатурации белков. Так как изоионная точка для большинства белков находится в слабокислой среде, то небольшое подкисление раствора белка способствует более полной его коагуляции при нагревании.

Осаждение белков концентрированными кислотами

Концентрированные минеральные кислоты (H₂SO₄,HCl,HNO₃и др.) вызывают необратимое денатурационное изменение белков, следствием чего является агрегация белковых молекул и их осаждение.

Денатурирующее действие минеральных кислот может быть объяснено их воздействием на функциональные группы белка. Минеральные кислоты, например, превращают отрицательную группу –СОО^-в недиссоциированную группу –СООН, что приводит к нарушению ионных связей /солевых мостиков/ и, как следствие, к разворачиванию полипептидных цепей.

При длительном воздействии концентрированными минеральными кислотами могут произойти гидролиз белка (разрыв пептидных связей), а также реакции нитрования, окисления, сульфирования, конденсации и др.

Ход работы.

1. Прилить воду к яичному белку.

2. Встряхнуть до образования однородного раствора.

3. Оценить свойства белка (прозрачность, растворимость, агрегатное состояние).

4. Отлить раствор в три пустые пробирки по 1 мл.

5. Зажечь спиртовку и нагреть пробирку № 1 полученный раствор белка.

6.В пробирку № 2 добавить 2 мл концентрированной азотной кислоты и перемешайте.

7. В пробирку № 3 добавить 2 мл ацетона и перемешайте.

8. Оценить свойства белка (прозрачность, растворимость, агрегатное состояние).

Результат оформите в виде таблицы: