Фитопатологическая экспертиза семян древесных пород

Задачей фитоэкспертизы является определение видового состава паразитических и сапрофитных микроорганизмов. Установление заражённости семян даёт возможность выбрать наиболее эффективный фунгицид для снижения инфекционного фона.

При определении заражённости семян необходимо установить внешнюю и внутреннюю инфекцию. Внешняя инфекция определяется макроскопическим методом путём визуального осмотра семян. Внутренняя инфекция устанавливается методом влажной камеры (ГОСТ 13056.5-76).

Порядок работы

1. Из исходного образца семян выделяют один средний образец и из разных мест среднего образца для определения внешней заражённости семян отбирают не менее 500 семян. Из них на анализ выделяют по 100 семян для всех видов клёна, ясеня, ильмовых, бука и по 200 семян для остальных пород.

2. При анализе семян лиственных пород (берёза, дуб, ольха, тополь и др.) и хвойных (ель, сосна, пихта, кедр, лиственница) определяют внешние признаки поражения семян болезнями (деформация, мумификация, ржавчина, плесень).

3. Заражённые семена взвешивают и учитывают в процентах от массы навески.

4. Для определения внутренней заражённости семян из разных мест среднего образца берут не менее 200 семян и из них выделяют 100 семян.

5. Отобранные семена дезинфицируют в растворе 2%-ного марганцево-кислого калия в течение 1-5 минут, затем многократно промывают дистиллированной водой. Семена можно также стерилизовать этиловым спиртом путём погружения семян в спирт на одну минуту.

6. Простерилизованные семена раскладывают в чашки Петри в микробиологическом боксе или на лабораторном столе с предварительной дезинфекцией поверхности стола спиртом. В каждую чашку Петри стерильным пинцетом, слегка приоткрыв чашку, раскладывают 100 семян на расстоянии друг от друга не менее 0.5-1 см (крупные семена - от 10 до 50 шт.). Фильтровальную бумагу в чашках Петри увлажняют дистиллированной водой (не менее 1 мм.)

7. На верхней стороне чашки карандашом по стеклу указывают номер образца и дату раскладки семян. Подготовленные чашки помещают на 7-10 дней в термостат с температурой 25-26°С.

8. Через неделю просматривают каждую чашку Петри. Для идентификации объекта необходимо приготовить временные препараты. На хорошо вымытое и высушенное предметное стекло наносят каплю дистиллированной воды и помещают в неё спороношение возбудителя с помощью препаровальной иглы. Препарат накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом сначала при малом, а затем при большом увеличении.

9. Диагностика факультативных паразитов базируется на окраске мицелия, строении конидиеносцев, форме конидий (приложение).

10. Учёт заражённости семян каждым патогеном проводят отдельно в процентах от количества разложенных семян. Заражённость сапрофитными грибами учитывают по степени встречаемости: единичная – до 5% заражённых семян, слабая – до 25%, средняя – до 50%, Полученные данные заносят в таблицу, а затем в бланки: «Результат анализа семян №…...», «Удостоверение о кондиционности семян №…».

№ образца	Проанали-зировано семян		Поражено по родам
№ образца	Проанали-зировано семян		Fusarium		Alternaria		Aspergillus		и т.д.
	шт.	%	шт.	%	шт.	%	шт.	%	шт.	%

Fusarium sp. – мицелий от нежно–розового до ярко–малинового или оранжевого цвета, очень тонкий, нежный, пушистый, быстро разрастающийся. Микроконидии одноклеточные, реже- с 1-2-мя перегородками, овальные, яйцевидные или грушевидные. Макроконидии с 3-9 перегородками, разные формы, кривизны и изогнутости.

Alternaria sp. - налёт тёмно–оливковый, состоящий из конидиеносцев и конидий. Конидии оливковые или чёрно–бурые, обратно - булавовидные в цепочках с 3-6 поперечными перегородками и с одной или несколькими продольными перегородками, форма цилиндрическая или овальные.

Aspergillus sp. – на семенах образуются тёмный мицелий в виде колоний, на которых в лупу или под микроскопом можно увидеть маленькие тёмные, порошащие головки. Конидиеносцы с ножкой, почти бесцветной, но чаще жёлтой, с шаровидным, толстостенным вздутием, несущим на своей поверхности радиально расположенные стеригмы. Они одноярусные, но чаще двухярусные. Конидии шаровидные, гладкие, коричневые или бурые.

Penicillium sp. – на семенах при повышенной влажности появляется плесневидный налёт зелёно-сизого цвета. Мицелий бесцветный, с возрастом иногда темнеющий. Конидиеносцы бесцветные, септированные, прямостоячие, в верхней части мутовчато-разветвлённые или образуют характерно построенную кисточку, несущую на конечных разветвлениях цепочки конидий. Конидии одноклеточные, круглые или овальные, в массе – большей частью зеленоватого цвета.

Mucor sp. – на семенах широко распространяющийся паутинный налёт, на котором невооружённым глазом или в лупу можно заметить отдельные тёмные головки – спорангии гриба. Мицелий бесцветный, состоящий из сильно разветвлённых толстых гиф. Спорангий заключает в себе большое число округлых, угловатых или овальных спор. Споры белые или дымчатые с бесцветной, гладкой оболочкой.

Rhizopus sp. – мицелий вначале паутинистый, затем- ватообразный, белого или сероватого цвета. Спорангиеносцы коричневые, почти чёрные, расположены группами на узлах столонов, откуда развиваются ризоиды. Спорангии шарообразные, споры угловатые, продольно исчерченные, тёмные, обычно чёрно-серые.

Trichoderma sp. – мицелий бесцветный, распростёртый, быстро растущий. Дерновинки с конидиеносцами подушечковидные, более или менее выпуклые, сначала белые, иногда жёлто-зелёные, позже тёмно-зелёные. Конидиеносцы в виде боковых ответвлений вильчато или тройчато разветвлённые. Стеригмы бутылковдные или конусовидные, расположены мутовочками по две-три или одиночно. Конидии округлые, скученные в головки, в массе жёлто-зелёные. В гифах иногда образуются хламидоспоры.

Trichothecium sp. – на семенах розоватая плесень, гифы стелющиеся, ветвящиеся, септированные. Конидиеносцы удлиненные, не разветвлённые, на вершине немного вздутые. Конидии грушевидные, двуклеточные, нередко с перетяжкой на перегородке, к основанию немного вытянутые, в массе розовые.

Cladosporium sp. – мицелий тёмно-оливковый, дерновинки бархатистые, зеленоватые, оливковые, черноватые, часто сливающиеся. Конидиеносцы обычно простые, бурые или оливковые. Конидии продолговатые, яйцевидные или циллиндрические, большей частью одноклеточные, продолговатые и тогда с 1-4 поперечными перегородками, грязновато-бурые или оливковые.

Cephalosporium sp. – колонии вначале белые, затем розоватые или красноватые. Гифы тонкие, слабосептированные, бесцветные. Конидиеносцы прямостоящие, несептированные, неразветвлённые. Конидии на концах конидиеносцев многочисленные, яйцевидные, эллипсоидальные или продолговатые, почти бесцветные или светло-розовые, собранные в склеенные слизью шаровидные головки.

Helmintosporium sp. – семена покрываются чёрным налётом, состоящим из спороношения гриба. Конидиеносцы одиночные или в пучках по 2-3, бурые, обычно с 5-8 перегородками. Конидии веретенообразные, слегка изогнутые, тёмно-оливковые, с 2-13 перегородками, на концах закруглены, конидии одиночные или, чаще, по 2-3 на конидиеносце.

Bothrytis sp. – мицелий хорошо развитый, септированный, образует густой сероватый налёт. Конидиеносцы одиночные, древовидноразветвлённые, коричневые или оливковые, иногда собраны в группы. Конидии в виде головок на конце конидиеносцев, одноклеточные, яйцевидные, бесцветные, реже дымчатые.

Verticillium sp. – мицелий хорошо развитый, септированный, вначале белый, затем оливковый. Конидиеносцы мутовчаторазветвлённые с 6-8 заострёнными конечными ветвями. Конидии одноклеточные, эллипсоидальные, бесцветные, затем коричневые.

Помимо вышеуказанных методов, для определения наружной инфекции семян можно использовать метод центрифугирования. Суспензию, полученную при смыве 100 семян, центрифугируют, микроскопируют и определяют споровую нагрузку на одно семя. Для определения внутренней инфекции семена можно высевать на твёрдые питательные среды (кислый картофельный агар, среда Чапека, агаризированное пивное сусло).