2020-06-29
139
В зависимости от целей применения среды подразделяют на:
▪ общего назначения – для выращивания разных видов бактерий;
▪ элективные – для выращивания отдельных видов прихотливых бактерий;
▪ дифференциально-диагностические – для выращивания и распознания вида бактерий по характеру роста.
По консистенции питательные среды подразделяют на жидкие, полужидкие, плотные.
К средам общего назначения относят:
▪ мясопептонный бульон (МПБ), в его составе мясная вода, 1% пептона и 0,5% хлорида натрия;
▪ мясопептонный агар (МПА), готовят, добавляя в горячий МПБ 2-3% агар-агара (безазотистое органическое вещество, получаемое из морских водорослей);
▪ питательный бульон (ПБ), готовят из концентрата на основе гидролизата белков рыбы;
▪ питательный агар (ПА), готовят из концентрата на основе гидролизата белков рыбы.
▪ питательная среда для определения мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов (МАФАнМ), готовят из концентратана основе гидролизата молока, обогащенная автолизатом дрожжей и фосфатом калия (ТУ 9229-026-04610209-94)
|
|
|
Элективные среды (лат. electus –избранный) готовят
из основных, чаще используют МПА или ПА, добавляя 510% стерильной сыворотки крови (сывороточный агар), дефибринированной крови (кровяной агар), автолизат дрожжей, красители, углеводы, желчь (желчный агар). Элективные среды предназначены для выращивания прихотливых бактерий, которые не растут на средах общего назначения. Для приготовления элективных сред выпускают концентраты:
▪ солевой бульон;
▪ молочно-солевой агар;
▪ среда СДА для определения спор мезофильных анаэробных бактерий.
Дифференциально-диагностические среды используют для выращивания и распознания отдельных видов бактерий по характеру роста. Они включают:
▪ среды Гисса для изучения биохимических свойств бактерий, готовят из концентрата, содержат индикатор и при расщеплении углевода цвет среды изменяется, в толще столбика накапливаются пузырьки СО2;
▪ среда Эндо для распознания роста кишечной палочки и сальмонелл, готовят из концентрата;
▪ среда Левина для тех же целей;
▪ висмут-сульфит агар для тех же целей;
▪ среда Клигера для выявления способности бактерий расщеплять глюкозу, лактозу, образовывать сероводород;
▪ Симмонс агар для распознания роста кишечной палочки и сальмонелл;
▪ среда Кода для выявления лактозоположительных микроорганизмов (кишечной палочки);
▪ среда Китт-Тароцци для выращивания анаэробов, в ее составе смесь печеночной воды и МПБ 2:1 с кусочками отварной печени и вазелиновым маслом на поверхности; среда RCM (улучшенный клостридиальный бульон) готовят из концентрата;
|
|
|
▪ дифференциальный улучшенный клостридиальный бульон (DRCM), предназначена для учета клостридий в пищевых продуктах и других материалах, готовят из концентрата;
▪ улучшенный клостридиальный бульон (RCM), готовят из концентрата;
▪ среда Сабуро для выращивания грибов, готовят из концентрата;
▪ среда Чапека для выращивания грибов, готовят из концентрата;
▪ кукурузно-лактозная среда для выращивания бифидобактерий и пропионовокислых бактерий.
Культивирование микроорганизмов
Культивирование – это выращивание бактерий на питательных средах.
Выращивание больших объемов бактерий на жидких или полужидких средах в биореакторах называют глубинным культивированием.
Для культивирования необходимы условия:
▪ оптимальная температура: для большинства микроорганизмов 370 , для лептоспир 28-300 , грибов 26-280 ;
▪ оптимальный рН, для большинства 7,0 – 7,2, при глубинном культивировании его корректируют;
▪ оптимальный окислительно-восстановительный потенциал: для аэробных микроорганизмов приток стерильного кислорода, для анаэробных - вакуум.
В лабораторных условиях культивирование проходит при оптимальной постоянной температуре, а для анаэробов еще и в бескислородных условиях.
Глубинное культивирование проводят в биореакторах, при соблюдении всех параметров, поэтому оно более результативное, накопление бактерий в несколько раз больше, чем в лабораторных условиях. Глубинное культивирование можно проводить как периодический процесс и по типу непрерывного, проточного.
Чистая культура - популяция бактерий одного вида, выращенная на питательной среде.
Культуры, полученные в результате размножения нескольких видов бактерий, называют смешанными, исследованию не подлежат и уничтожаются.
Штамм – культура имеющая четкие видовые свойства и биологические особенности.
Клон – культура, выращенная из одной бактериальной клетки.
Посев – внесение исследуемого материала в питательную среду. Существует несколько способов посева:
▪ способом Дригальского – штрихами по поверхности питательной среды в чашке Петри;
▪ глубинный, когда в чашку Петри вносят исследуемый материал, затем заливают расплавленной, а затем охлажденной до 400 питательной средой;
▪ уколом, пользуясь бактериологической петлей или пипеткой сеют на полужидкие среды или на плотные, но расплавленные и охлажденные;
▪ смешиванием исследуемого материала с жидкой питательной средой с помощью бактериологической петли или пипетки;
▪ зигзагом сеют на плотные среды в пробирках с помощью бактериологической петли;
▪ газоном сеют на плотные среды в чашки Петри, равномерно распределяя бульонную культуру по поверхности, избыток удаляют;
- по Шукевичу, когда исследуемый материал помещают в конденсат плотной питательной среды в пробирке, применяют для подвижных бактерий.
Изучение питательных сред, условий культивирования необходимы для осваивания самого точного метода микробиологических исследований - бактериологического исследования.
Бактериологическое исследование включает выделение микроорганизмов из среды их обитания, получение чистой культуры и ее идентификацию (определение вида).
Первая задача бактериологического исследования – выделение чистой культуры. Аэробные микроорганизмы выделяют в три этапа.
