Подпись преподавателя

РАБОЧАЯ ТЕТРАДЬ

ПО ЦИТОЛОГИИ, ГИСТОЛОГИИ И ЭМБРИОЛОГИИ

СТУДЕНТА II КУРСА ВЕТЕРИНАРНОГО ФАКУЛЬТЕТА ГРУППА ________

___________________________________________________________________________

СПЕЦИАЛЬНОСТЬ ВЕТЕРИНАРИЯ

УЧЕБНЫЙ ГОД 2020/2021

ГИСТОЛОГИЧЕСКАЯ ТЕХНИКА

Требования к гистологическому препарату:

- тонкий

- прозрачный

- оптически дифференцированный (цветной)

 

1. Взятие свежего материала (объем 1 см³)

2. Фиксация (сущность – зафиксировать прижизненную структуру белков)

Фиксаторы: 10% забуференный раствор нейтрального формалина; спирты и др.

3. Уплотнение срезов

 - заморозка (уплотнение жидкой угольной кислотой)

 - пропитывание разогретым парафином (t = 57⁰С)

 - пропитывание раствором целлоидина

Материал дегидратировать (обезводить) и обезжирить в спиртах восходящей концентрации, затем пропитать веществом, в котором растворяется парафин (ксилол, толуол, хлороформ и др.), пропустить через смесь органического растворителя (парафин + хлороформ 1: 1), уплотнить парафином.

4. Приготовление срезов на микротоме (толщина срезов 5-8 мкм).

5. Окраска срезов

Красители:

   а) основные: окрашивают преимущественно ядра клеток (например, гематоксилин)

       Структуры, окрашивающиеся основными красителями, называются базофильными.

   б) кислые: окрашивают преимущественно цитоплазму (например, эозин)

       Структуры, окрашивающиеся кислыми красителями, называются оксифильными или ацидофильными.

   в) нейтральные или специальные (например, орсеин окрашивает эластические волокна, судан и осмиевая кислота – жиры, азотнокислое серебро – нервная ткань)

Депарафинировать срез органическим растворителем (ксилол), провести через спирты нисходящей концентрации (наводнить), окрасить красителями, провести через спирты восходящей концентрации (обезводить), просветлить срез в органическом растворителе (ксилол) и заключить в бальзам (смола пихты или канадского кедра), накрыть покровным стеклом.

 

ПРАВИЛА МИКРОСКОПИРОВАНИЯ

1. Установить микроскоп в «Рабочее положение»: объектив малого увеличения располагается на расстоянии примерно 1 см от поверхности предметного столика, перпендикулярно к нему.

2. Настроить освещение, пользуясь вогнутой стороной зеркала (плоскую сторону используют при ярком освещении) или включить встроенный источник освещения.

3. Поместить гистологический препарат на предметный столик и, пользуясь макровинтом, добиться четкого изображения. Перемещая препарат по предметному столику руками, рассмотреть все имеющиеся структуры.

4. При необходимости перейти на большое увеличение, нужно повернуть револьвер с объективами до щелчка и расположить объектив большого увеличения перпендикулярно к поверхности предметного столика. С помощью макровинта добиться появления изображения, а затем, воспользовавшись микровинтом, получить максимально четкое изображение. Рассмотреть имеющиеся структуры.

5. Закончить микроскопирование на малом увеличении, повернув револьвер с объективами до щелчка и установив объектив малого увеличения перпендикулярно к поверхности предметного столика.

6. Снять препарат с предметного столика, поместить его в коробку для гистологических препаратов.

7. Отключить встроенный источник освещения.

ЗАНЯТИЕ 1.

ТЕМА: «МЕТОДЫ И ТЕХНИКА ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ. РАБОТА С МИКРОСКОПОМ».

                                                         ОСНОВНЫЕ ТИПЫ ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ ЭЛЕМЕНТОВ

                                   КЛЕТОЧНЫЕ (40 %)                                                  НЕКЛЕТОЧНЫЕ (60 %)

                                                                              Межклеточное вещество               Симпласты:               Синцитии

    Аморфное вещество                Волокна:

 

.                                                             1. Коллагеновые (в т.ч. ретикулярные)

                                                                                                                              2. Эластические

Симпласт - ______________________________________________________________________________________________________________

_________________________________________________________________________________________________________________________

_________________________________________________________________________________________________________________________

Примеры симпластов:

1. Мышечное волокно скелетной мышечной ткани

2. Остеокласт

3. Многоядерные гигантские клетки.

Синцитий - _____________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________

________________________________________________________________________________________________________________________

Препарат 1:Мультиполярная нервная клетка Окраска:импрегнация АgNO3   1. Цитолемма 2. Цитоплазма 3. Ядро клетки 4. Отростки

Препарат 2:Симпласт (поперечно-полосатые мышечные волокна языка) Окраска:гематоксилин-эозин 1. Симпласт 2. Цитолемма - сарколемма 3. Цитоплазма – саркоплазма (ацидофильная) 4. Ядра симпласта (базофильные)

Препарат 3:Межклеточное вещество (эластический хрящ ушной раковины) Окраска:гематоксилин-орсеин 1. Хрящевые клетки 2. Межклеточное вещество 2.1. Аморфное вещество 2.2. Эластические волокна

Подпись преподавателя: _______________________________

ЗАНЯТИЕ 2.