Материалы и оборудование

Чашки Петри, пробирки с голодным агаром, сито с диаметром отверстий 0,25 мм, ступка, спиртовка, скальпель, весы аналитические, предметные стекла, лезвия бритвы, пробирка, микроскоп, исследуемая почва, резиновая перчатка.

Ходработы

Разогретую агаризованную воду, соблюдая стерильность, разливают в чашки Петри и дают пластинке застыть.

Небольшое количество воздушно-сухой исследуемой почвы тщательно растирают в ступке пальцем в резиновой перчатке и насыпают в сито с диаметром отверстий 0,25 мм. Сито с почвой взвешивают на аналитических весах и высевают почвенный мелкозем равномерно по всей поверхности агаровой пластинки. Следует учесть, что меньшая навеска почвы дает более высокие показатели. Наиболее благоприятна навеска до 20 мг. Сито с оставшейся почвой вновь взвешивают и определяют точную навеску высеянной почвы. Одной пробой почвы засевают три чашки Петри, две из них используют для подсчета бактерий и грибов, третью—для подсчета актиномицетов. Засеянные чашки Петри помещают в термостат на проращивание при температуре 25—28 °С.

Количество грибов и бактерий подсчитывают через 2—3 суток после посева, актиномицетов—через 5—7 суток.

Для учета количества микроорганизмов на агаровой пластинке пробиркой с ровным краем вырезают пять дисков: один—в центре пластинки и четыре—по двум взаимно перпендикулярным диаметрам. Диск переносят на предметное стекло и лезвием бритвы разрезают на полоски так, чтобы ширина полоски умещалась в поле зрения микроскопа при малом увеличении (объектив 8´, 10´, 20´, окуляр 10´, 15´).

Каждую полоску систематически просматривают под микроскопом и исследуют каждую почвенную частичку, отмечая, какие микроорганизмы развились в ее сфере. Одна почвенная частичка может дать начало одновременно колонии бактерий, актиномицетов и грибов. Группу слившихся почвенных частичек следует считать за один образовательный центр. Подсчитав количество микроорганизмов в пяти дисках, определяют содержание микроорганизмов в 1 г. исследуемой почвы по формуле:

Х = A x C / 5B x D

где х— количество микроорганизмов в 1 г. почвы, А — количество колоний в пяти дисках, В — площадь диска, см² (диаметр диска определяют полоской миллиметровой бумаги), с— площадь чашки Петри, 1 см² D — навеска почвы, г.

Для большей точности результатов следует внести поправку на влажность исследуемой почвы.

Наблюдения за бактериями

При высеве мелкозема вокруг почвенной частички образуется водная пленка, через 10—15 ч в ней развиваются первичные скопления бактериальных клеток. Нередко таких скоплений может быть два-три и более вокруг одной почвенной частички, что указывает на соответствующее число жизнеспособных зародышей. Через 24—48 ч клетки занимают все пространство водной пленки, формируя микроколонию. Микроколонии бактерий характеризуются крошечными размерами, одно-слойным расположением клеток, нередко меньшими размерами клеток. Далее в микроколонии могут происходить изменения: подвижные формы утрачивают подвижность, а спорообразующие формируют споры и т.д. Микроколонии могут быть сложными, образованными несколькими разными видами бактерий, располагающимися в виде островков, секторов, концентрических зон.

Наблюдения за грибами

Формы роста грибов вокруг почвенных частичек называют псевдоколониями. Последние отличаются от обычного роста на питательных средах редуцированными размерами (толщина гиф, длина конидиеносцев, размер и число конидиеспор) и упрощенной структурой (образованы из одной или немногих гиф, стерильных, реже с конидиальным плодоношением). В отличие от микроколоний бактерий гифы грибов формируют свои водные пленки, что и обеспечивает им рост по поверхности агара.

 

Наблюдения за актиномицетами

Псевдоколонии актиномицетов вокруг почвенной частицы отличаются от обычного роста их на питательных средах меньшими размерами, слаборазвитым субстратным мицелием, меньшим числом спороносцев. Спороносцы располагаются в виде клубка или дерновины либо на самой почвенной частичке, либо на некотором расстоянии от нее в виде кольца или нескольких колец.

Метод трудоемок и требует навыка.