double arrow

III. ВЕКТОРНЫЕ СИСТЕМЫ БАКТЕРИЙ

2

 

Внехромосомные генетические элементы грамотрицательных бактерий. Понятие о селекции и разрешающей способности эксперимента. Структурно-генетическая организация полового фактора. Мини-репликон. Образование рекомбинантных молекул in vivo и фрагментация генома E.coli на F'- плазмидах.

Плазмиды бактерий и их общие свойства. Сегрегационная и структурная нестабильность плазмид. Классификация плазмид. Плазмиды бактериоцино-генности и лекарственной устойчивости бактерий. Принцип модульной организации плазмид. Мигрирующие элементы и конструирование векторов для клонирования хромосомных генов бактерий  in vivo. Применение плазмиды рYLB113 для анализа геномов грамотрицательных бактерий.

Трансдуцирующие бактериофаги. Организация генома бактериофага лямбда. Общая и генерализованная трансдукция. Создание линий специфически трансдуцирующих бактериофагов. Фрагментация генома E.coli в фаговом геноме.

Природные плазмидные векторы грамотрицательных бактерий для клонирования в системе in vitro. Организация, преимущества и недостатки плазмиды лекарственной устойчивости рSC101 и фактора колициногенности – ColE при использовании в качестве векторов E.coli. Критерии, используемые при конструировании плазмидных векторов. Конструирование и структура «искусственных» векторов. Плазмиды pRSF2124 и pMB9 – первые искусственные векторы. Создание плазмиды рBR322. Характеристики рBR322, ее преимущества и недостатки. Другие распространенные клонирующие плазмиды для грамотрицательных бактерий.

Свойства бактериофага лямбда как универсальной системы для клонирования in vivo и in vitro. Структурно-генетическая организация и биология фага лямбда. Репликация ДНК бактериофага лямбда. Молекулярные векторы на основе генома бактериофага лямбда. Векторы внедрения и векторы замещения. Клонирующая емкость вектора. Космиды. Фазмиды. Конструирование библиотек и клонотек.

Нитевидные фаги в качестве клонирующих векторов. Структура вириона и инфекционный цикл. Конструкция и использование векторов на основе нитевидных фагов. Применение векторов на основе фагов.

Гибридные векторы на основе фага и плазмиды. Основные клонирующие фазмидные векторы.

Специализированные клонирующие векторы для грамотрицательных бактерий. Векторы прямого отбора. Векторы для клонирования промоторов и терминаторов. Векторы, предназначенные для изучения регуляции экспрессии генов. Векторы с регулируемой копийностью.

Введение экзогенной ДНК в клетки грамположительных бактерий. Векторы для Bacillus. Проблемы плазмидных векторов. Стабильность векторов. Векторы на основе бактериофагов. Челночные векторы.

 

IV. ВЕКТОРЫ ДЛЯ КЛОНИРОВАНИЯ В ЭУКАРИОТИЧЕСКИХ КЛЕТКАХ

 

Генетическая организация дрожжей. Внехромосомные элементы сахаромицетов. Введение ДНК в дрожжевые клетки. Векторы для дрожжевых клеток. Требования к вектору. Последовательности, обеспечивающие отбор и размножение в дрожжах и бактериях. Селективные маркеры дрожжей. Принципы клонирования. Номенклатура дрожжевых векторов и сайты инициации репликации. Линейные векторы.

Введение молекул ДНК в клетки млекопитающих. Вирусы, плазмиды, фрагменты ДНК. Векторы экспрессии млекопитающих. Требования к векторам экспрессии млекопитающих. Организация генома вируса SV40. Векторы на основе вируса SV40. Основные проблемы при конструировании векторов млекопитающих.

Векторы для клонирования в растениях. Молекулярная биология
Тi-плазмиды Agrobacterium tumefaciens. Структура Т-ДНК. Использование Ti-плазмиды в качестве векторов для создания трансгенных растений. Бинарные системы. Вирусы как векторы для растений.

 


Литература

 

О с н о в н а я:

1. Глик Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение / Б. Глик, Дж. Пастернак. М.: Мир, 2002.

2. Щелкунов С.Н. Генетическая инженерия / С.Н.Щелкунов. Новосибирск: Изд-во Сибирского университета, 2004.

3. Рыбчин В.Н. Основы генетической инженерии / В.Н. Рыбчин. Санкт-Петербург: Изд-во СПбГТУ, 2002.

4. Сингер М. Гены и геномы / М. Сингер, П. Берг. М.: Мир, 1998.

5. Современная микробиология: Прокариоты / Под ред. Й. Ленгелера, Г. Древса, Г. Шлегеля. М.: Мир, 2005.

6. Титок М.А. Плазмиды грамположительных бактерий / Под ред. Ю.К. Фомичева. Мн.: БГУ, 2004.

 

Д о п о л н и т е л ь н а я:

1. Янковский Н.К. Конструирование и анализ клонотек геномов /
Н.К. Янковский. Сер. Биотехнология в сб. «Итоги науки и техники». М.: ВИНИТИ, 1989.

2. Рекомбинантные молекулы: значение для науки и практики / Под ред. Р. Бирса, Э. Бэсита. М.: Мир, 1980.

3. Генная инженерия растений / Д. Драйвер и др. М.: Мир, 1991.

4. Сельскохозяйственная биотехнология: векторные системы молекулярного клонирования / Под ред. М. Альтхерра, П. Балбаса, Р. Берка. М.: Агропромиздат, 1991.

5. Рекомбинантные молекулы: значение для науки и практики / Под ред. Р. Бирса, Э. Бэсита. М.: Мир, 1980.

6. Плазмиды. Методы. / Под ред. К. Харди. М.: Мир, 1990.

7. Хазипов Н. Генетическая инженерия в ветеринарии / Под ред. Н. Хазипова. Казань: КВИ, 1991.

8. Лихтенштейн К. Генетическая инженерия растений. Клонирование ДНК. Методы / К. Лихтенштейн, Дж. Дрейпер. Под ред. Д. Гловера. М.: Мир, 1988.

9. ВоловаТ.Г. Биотехнология/ Т.Г. Волова. Новосибирск: Изд-во Сибирского отделения Российской Академии наук, 1999.

10. Бирюков В.В. Основы промышленной биотехнологии / В.В. Бирюков. М.: Колос, 2004.

11. Новое в клонировании ДНК. Методы / Под ред. Д. Гловера. М.: Мир, 1989.

 



Понравилась статья? Добавь ее в закладку (CTRL+D) и не забудь поделиться с друзьями:  


2

Сейчас читают про: