Методы обнаружения анаэробов

Бактериологическое исследование на присутствие возбудителей анаэробных инфекций проводят при подозрении на ботулизм, энтеротоксемию овец, дизентерию ягнят, некробактериоз, столбняк, эмфизематозный карбункул, злокачественный отек и брадзот овец, а также при подозрении на обсеменение этой микрофлорой продуктов питания.

К анаэробам, представляющим большую опасность для человека и животных, относят Clostridium botulinum, Cl. perfringens, С. botulinum представляет собой слабо подвижную палочку длиной 4-8 мкм и шириной 0,6-0,8 мкм, грамположительную. Спора располагается на конце палочки, что создает вид теннисной ракетки или короткой свечи с пламенем.

Cl. perfringem представляет короткую, спорообразующую, неподвижную, грамположителыгую палочку, является анаэробом. Существует 6 типов С1. perfringens, обозначаемых начальными буквами латинскою алфавита. Некоторые представители этих типов могут быть патогенными. Типы В, С, Д, Е являются возбудителями энтеротоксемии животных, а тип С также и возбудителем некротического энтерита людей.

При бактериоскопии для обнаружения анаэробов готовят 2-5 мазков-отпечатков из каждой присланной пробы и окрашивают по Граму или метиленовой синью, а при необходимости - на споры и капсулы. При микроскопии обращают внимание на форму, наличие спор, капсул и расположение отдельных микроорганизмов.

По 3-5 мл приготовленной взвеси засевают в четыре большие пробирки со средой тина Тароцци, предварительно прогретой, и в кипящей водяной бане в течение 20-30 мин, а затем быстро охлажденной до температуры не ниже 50°С. Посевы перед термостатированием прогревают: две пробирки при температуре 80°С в течение 20 мин. При исследовании на С1. botulinum типа Е одну пробирку прогревают при температуре 60*С в течение 15 мин (при этом сохраняются споры типа Е), а другую при 80°Св течение 20 мин, остальные 2 пробирки оставляют непрогретыми.

При подозрении на Cl. perfringens для выявления типа Е одну непрогретую пробирку и одну прогретую при 60°С выдерживают при температуре 28°С. Другие пробирки (непрогретую и прогретую при 80°С) инкубируют при температуре 30°С на другие анаэробы.

Наблюдают за ростом ежедневно в течение 5-10 суток. При обнаружении роста производят микроскопическое исследование.

Морфологические свойства и характер роста некоторых патогенных анаэробов приведены в табл. 10.5.

Для биопробы можно использовать присланный материал и чистую культуру. При подозрении на ботулизм биопробу ставят на белых мышах (реакция нейтрализации токсина противоботулинистической сывороткой).