Питательные среды. Методика постановки САЛМтеста

Методика постановки САЛМтеста

Принцип действия

С8-эстераза гидролизует 4-метилумбеллиферрил каприлат, содержащийся в индикаторной зоне полоски. Освобожденный 4-ме-тилумбеллиферрон под источником УФ-излучения дает синюю флю­оресценцию, регистрируемую как положительная реакция.

- Используют 24-часовую культуру, подозрительную на сальмонеллы со среды Эндо, агара с бриллиантовым зеленым, МасСоnkеу агара, агара с эозин-метиленовым синим (примечание: для обнаружения присутствия саль­монелл неподходящими являются среды, предназначен­ные для обнаружения продукции сероводорода - черный преципитат затрудняет учет реакции на диагностической полоске).

- Добавляют на зону индикации полоски приблизительно 10 мкл реактива для САЛМтест.

- При помощи инокуляционной петли втирают испытуемую культуру в зону полоски; в случае роста чистой культуры (или же достаточно друг от друга изолированных колоний на агаровой среде) можно бактериальный рост снимать с поверхности агара непосредственно зоной полоски.

- Полоску инкубируют 10-15 минут при комнатной темпе­ратуре.

- Параллельно ставят отрицательный контроль: добавляют реактив на зону полоски и инкубируют без нанесения бак­териальной культуры.

- По истечении указанного времени учитывают реакции под УФ-лампой с длиной волны приблизительно 360 нм. Считывание реакций необходимо выполнять в темноте, лучше всего в специальной установке, предназначенной для оценки флюоресценции (например шкаф Гансена), по­ложительная реакция проявляется возникновением синей флюоресценции в индикаторной зоне полоски.

- Штаммы с положительной реакцией подтверждают даль­нейшей идентификацией, например при помощи набора ЭНТЕРО-Скрин (время инкубации 4 часа).

Консервирующие смеси используют при отсутствии необходимых усло­вий и сред для посева в течение 3-4 ч с момента взятия материала. Обычно объем консервирующей смеси должен составлять ²/₃ от объема материала, взятого для исследования.

Глицериновая смесь. Смешивают 1000 см³ изотонического раствора хло­рида натрия и 500 см³ глицерина, затем добавляют 20%-ный раствор на­трия фосфорнокислого (Na₂HP0₄) в таком количестве, чтобы рН смеси со­ответствовал 7,8-8,0. Смесь стерилизуют текучим паром 3 дня по 30 мин.

Фосфатная буферная смесь. В 1000 см³ дистиллированной воды раство­ряют 0,45 г калия фосфата однозамещенного (КН₂НР0₄) и 5,34 г натрия фосфата двузамещенного (Na₂HP0₄). Стерилизуют 30 мин при 121° С.

Боратно-буфериый раствор. Смешивают 57 г кристаллической буры, 84 г борной кислоты, 99 г натрия хлорида. Затем 20 г полученной смеси растворяют в 1000 см³ дистиллированной воды. Стерилизуют 10 мин при 121° С.