Выделение и идентификация М. bovis

Микроскопическое исследование исходного материала

Бактериологическое исследование

Объектом исследования является конъюнктивальный секрет. Возбудитель отличается малой устойчивостью, поэтому материал помещают в небольшой объем (1-2 мл) стерильного физиологического раствора и исследуют не позднее двух часов после взятия, лучше производить посев на питатель­ные среды непосредственно в момент взятия материала.

При микроскопии приготовленных препара­тов, окрашенных по Граму, находят короткие, вплоть до кокков, толстые, капсулированные грамотрицательные палочки размером 1,0-1,5 х 1,5-2,5 мкм, распо­лагающиеся преимущественно парами, иногда — в виде цепочек.

Культивирование. Для большинства видов рода, и в том числе для М. bovis, характерны сложные пищевые потребности. Моракселлы растут на средах, обогащен­ных кровью или сывороткой крови, температурный оптимум 33-35° С, рН 7,2-7,6, аэробы. Материал засевают на кровяной или «шоколадный» агар и посевы культивируют в условиях обычной атмосферы в течение 2-3 су­ток. На простом агаре возбудитель не растет.

Через 48-72 часа на кровяном агаре с кровью крупного рогатого скота или лошади образуются округлые, выпуклые или плоские серо-бе­лые колонии диаметром до 1 мм, с зоной бета-гемолиза или без него. Счи­тается, что гемолитичность — признак вирулентности штаммов. На «шо­коладном» агаре зона гемолиза имеет темный цвет. Штаммы, выделен­ные от лошадей, проявляют гемолитические свойства только на «шоко­ладном» агаре. Колонии обычно врастают в агар. Консистенция бакте­риальной массы крошковидная, и взвесь бактерий в физиологическом ра­створе нестабильна. В последующих пассажах колонии имеют мягкую консистенцию, и бактериальная суспензия из них в физиологическом ра­створе не вьгладает в осадок.

Морфология клеток моракселл в культуре. Морфология клеток в культуре и исходном материале однотипная, но на питательных средах часто появляются признаки полиморфизма: клетки варьируют по размеру, форме, могут присутствовать нити. Особенно силь­но полиморфизм проявляется при недостатке кислорода, превышении тем­пературы. Клетки жгутиков не имеют, может быть капсула.

Идентификация М. bovis на уровне рода. Группа сходных с моракселлами грамотрицательных палочковидных бак­терий и кокков весьма обширна. Общим свойством моракселл и ряда сходных бактерий является отсутствие способности расщеплять углеводы с образовани см кислоты. Внутри этой группы неффментирующих углеводы грамотрицатель­ных бактерий моракселлы даффереицируют по признакам, изложенным в табли­це 79.

Идентификация моракселл на уровне подрода и вида. Род Moraxella подразделяется на подроды Moraxella и Branhamella. К первому относятся виды, имеющие палочковидную форму с тенденцией к образованию кокков, ко второму — виды, представленные исключительно кокковыми клетками.