Биопроба

Морфология клеток F.necrophorum в культуре

В первичных культурах, в печеночном бульонe с добавлением сыворот­ки крови клетки имеют форму нитей с утолщениями, без разветвлений, дли­ной 10-100 мкм и шириной 0,5-0,7 мкм. В старых бульонных культурах и агаровых преобладают палочки длиной 1,8-2 мкм, шириной 0,5-0,7 мкм. Характерным является неравномерное зернистое окрашивание кле­ток возбудителя, что хорошо проявляется при фиксации мазков спирт-эфи­ром и окрашиванием в течение 2-3 секунд фуксином Циля, метиленовым Синим Леффлера или фуксином-синькой по Муромцеву.
F. necrophorum спор, капсул и жгутиков не образует.

Идентификация F.necrophorum по ферментативным признакам.
При изучении ферментативной активности у выделенной чистой культуры определяют способность гидролизовать гшшурат, эскулин, образовывать ин­дол, сероводород, кислоту из углеводов. Для возбудителя некробактериоза характерно: отсутствие способности к гидролизу гиппурата, эскулина, обра­зованию кислоты из галактозы, маннозы, целлобиозы, мелибиозы, сахарозы, трегалозы, раффинозы, салицина; возбудитель непостоянно расщепляет глю­козу, дает кислотообразование на среде с фруктозой, сахарозой, мальтозой. Огдельные штаммы могут ферментировать маннит, дульцит, глицерин; не рас­щепляет желатину и свернутую сыворотку, не редуцирует нитраты, образует индол и сероводород. Критерии дифференциации F.necrophorum от сходных фузобактерий представлены в таблице 84. При изучении ферментативной активности фузобактерий могут быть использованы коммерческие анаэроб­ные идентификационные системы (API 20A, API - LYM, ATB 32A, Minitek anaerobic 11). Вид F.necrophorum неоднороден по биологическим свойствам, что позволяет выделить в нем 4 биотипа (таблица 87).

Проводят с целью выделения чистой культуры возбудителя и проверки патогенных свойств. Выделение чистой культуры возбудителя, ввиду час­той контаминации материала сопутствующей микрофлорой, путем посева на питательные среды не всегда успешно. Поэтому изоляция возбудителя с использованием биопробы имеет существенное диагностическое значение. Из лабораторных животных чувствительны кролики и белые мыши. Наи­более удобной лабораторной моделью является кролик. Биопробу прово­дят одновременно с посевом материала на питательные среды. Исследуе­мый материал растирают в физиологическом растворе (1:10) и вводят кро­ликам в дозе 0,5-1 мл подкожно в область средней трети наружной повер­хности уха или внутрикожно в область живота. Белым мышам материал вводят в дозе 0,2-0,4 мл подкожно у основания хвоста. В случае необхо­димости аналогичным образом животных заражают выделенной культу­рой. Наблюдение за животными осуществляют в течение 10 суток. В положительных случаях на месте инъекции через 3-4 дня или позднее развива­ется воспалительный процесс с некрозом кожи.