Микроскопическое исследование исходного материала. Бактериологическое исследование

Бактериологическое исследование

Прижизненно берут стерильным ватным тампоном фекалии из прямой киш­ки, плотно прижимая тампон к поверхности слизистой. Тампон помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором. У павших и убитых с диагностической целью животных не позднее двух часов после гибели берут соскобы слизистой пораженного сегмента кишки, предварительно освобожденного от содержимого. Материал также помещают в пробирку со стерильным физиологическим раствором (1-2 мл). Исследование про­водят в кратчайшие сроки после взятия (2-8 ч), в случае необходимости материал транспортируют в термосе со льдом.

Результаты микроскопического изучения материала имеют существенное диагностическое значение, поскольку культивирование возбудителя пред­ставляет трудную задачу. Морфологически S.hyodysenteriae и S.innocens неразличимы, поэтому существенно количественное содержание характер­ных спирохет в материале. У больных животных в одном поле зрения обыч­но обнаруживают 5-10 и более спирохет. Клетки S.hyodysenteriae грамотрицательные, спиралевидные, завитки крупные, правильной формы в количестве 2-4, может быть 8-10, концы заостренные, размер 0,3-0,4x7-9мкм.

Обнаружение S. hyodysenteriae в исследуемом материале проводят пу­тем темнопольной, фазовоконтрастной микроскопии или исследованием ок­рашенных препаратов.

Для обнаружения живых, подвижных трепонем берут 1-2 капли иссле­дуемого материала, готовят препарат «раздавленная капля» и просматрива­ют его в микроскопе с увеличением 280-400 раз (7-10x40, водная иммер­сия). Характер движения спирохет зависит от температуры: при 22°С наблю­дается изгибание клетки и медленное скольжение, при температуре 37-42°С — активное змеевидное поступательное движение. Кишечные кампи-лобактерии гораздо толще спирохет, имеют тупые концы, движутся, враща­ясь вокруг оси. Для увеличения контрастности можно к исследуемому мате­риалу добавлять каплю следующего красителя: метиленовый синий — 3 г, спирт этиловый 96°— 25 мл, 1%-ный раствор КОН —
1 мл, глицерин —10 мл, вода дистиллированная — 90 мл. Смешивают воду и спирт, затем растворя­ют метиленовый синий, смесь выдерживают при температуре 37°С в течение 48 часов, фильтруют и к фильтрату добавляют КОН и глицерин.

При изготовлении окрашенных препаратов мазки фиксируют над пла­менем горелки, но лучше этанолом или метанолом. Окрашивают по Гра-му, фуксином Пфейффера, по Романовскому-Гимза, краской виктория го­лубая. Последний краситель готовят следующим образом: в 5 мл этанола (абсолютного) растворяют 0,5 г виктории голубой 4-R, затем добавляют 95 мл дистиллированной воды, компоненты перемешивают. Мазки при этом методе окрашивания фиксируют 10%-ным формалином в течение
15 минут, окрашивают 5 минут раствором виктории голубой, промывают водой, под­сушивают на воздухе и исследуют с масляным иммерсионным объективом.

При наличии соответствующих иммунных сывороток обнаружение и идентификация возбудителя может быть проведена методом флуоресциру­ющих антител, иммуноферментным методом.