Питательные среды. Таблица 89 - Дифференцирующие признаки видов рода Serpulina

Таблица 89 - Дифференцирующие признаки видов рода Serpulina

Идентификация S. hyodysenteriae по ферментативным признакам

С учетом происхождения исследуемого материала дифференцировать S. hyodysenteriae приходится от S. innocens. Отличия S. hyodysenteriae от кишечных вибрионов по морфологическим критериям изложены выше.

Для дифференциации видов рода Serpulina используют следующие кри­терии (табл. 89). Дифференциация этих двух видов серпулин наиболее доступна по характеру гемолиза, тес­там на интенсивность гемолиза и индолообразование.

¹⁾ S. hyodysenteriae не ферментирует арабинозу, целлобиозу, эскулин, эрит­рит, галактозу, глюкозу, лактозу, гликоген, амигдалин, маннит, маннозу, меле-цитозу, рибозу, салицин, крахмал, сахарозу, трегалозу, ксилозу, кроме мальто­зы расщепляет глюкозу (Smibert, 1984).

Тест на интенсивность гемолиза проводят следующим образом. Культу­ру выращивают в течение 4 суток на агаровой среде, затем вырезают ага­ровый блок (0,5 см²), помещают его на свежий кровяной агар и инкубируют 4 дня. Если это культура S. hyodysenteriae, то по периметру агарового бло ка образуется светлая зона бета-гемолиза шириной 1-2 мм. S.innocens такой гемолитической реакции не дает.

Для выявления способности образовывать индол па поверхность агаро­вой культуры помещают индикаторную бумажку. S. hyodysenteriae, в отли­чие от S. innocens, образует индол, и бумажка синеет. Индикаторные бу­мажки пропитывают 1%-ным раствором пара-диметил-аминобензоальдегида в 10%-ном растворе соляной кислоты.

Триптический соевый кровяной агар со спектомицином. Соевую муку смешивают с дистиллированной водой в соотношении 1:3 и, помешивая, кипятят в течение 15-20 минут. Остужают до 40°С, при помощи 20%-ного едкого натра доводят рН до 8,0, вносят фарш поджелу­дочной железы крупного рогатого скота (10%) и 2% хлороформа (объем/ объем). Емкость закрывают резиновой пробкой, перемешивают через 0,5-1-2 часа и далее ежедневно в течение 3-4 дней. Контролируют рН и под­держивают его на уровне 7,8-8,0. Через три недели (после формирования осадка) определяют содержание аминного азота, устанавливают добавле­нием дистиллированной воды его уровень 140-160 мг%, доводят рН до 7,2-7,4, вносят 1% пептона, 0,5% натрия хлорида, 0,25% глюкозы. Смесь кипятят 2-3 минуты, фильтруют, добавляют 2% агара. Затем емкости с питательной средой переносят в герметический настольный бокс, в течение Пяти минут через среду пропускают свободный от кислорода СО₂ или азот, вносят в среду 0,05% солянокислого L-цистеина, раствором бикарбоната натрия (5%) устанавливают рН на уровне 7,2-7,4. Флаконы со средой закрывают пробками из силиконовой резины и стерилизуют при 110°С в течение 30 минут. Перед использованием среду расплавляют, переносят в настольный бокс, пропускают через нее стерильный СО₂ или азот, после остывания агара до 42-45°С в него вносят спектиномицин (400 мкг/мл), 10% дефибринированной крови барана, разливают по чашкам Петри и ос-танляют в боксе до застывания. Слой агара в чашках должен быть толщи­ной около 0,5 см.