Серологическая диагностика. Биопроба. Используют при диагностике инфекции, вызываемой M.hyopneumoniae

Биопроба. Используют при диагностике инфекции, вызываемой M.hyopneumoniae. Для заражения берут поросят-сосунов или животных 2-3-месячного воз­раста, желательно выращенных без молозива, из хозяйств, благополучных по данной инфекции. В качестве материала для заражения используют надосадочную жидкость легочной суспензии (1:100), обработанную ингиби­торами, провереннную на наличие бактериальных контаминантов, или тка­невый материал предварительно пропускают через мембранные фильтры. Заражение проводят интраназально или трахеально.

Таблица 96 - Дифференциальные признаки свиных микоплазм

Примечание: аэробно/анаэробно, w — слабая реакция, н.д. — нет данных.

Фильтр помещают в стерильный фосфатно-солевой буферный раствор (рН 7,5) и отмывают на магнитной мешалке в течение 10 минут.

Фильтр берут пинцетом и ополаскивают в аналогичном буфере.

Просушивают мембраны на стерильной фильтровальной бумаге, под­писывают, разрезают на 3 части, в соответствии с подписями (1,2,3).

Каждую часть фильтра помещают в лунку планшета; к отдельным частям фильтра добавляют предварительно разведенные сыворотки M.hyopneumoniae, M.flocullate и нормальную кроличью сыворотку, инку­бируют при комнатной температуре в течение 30 минут.

Каждую часть фильтра споласкивают в фосфатно-солевом буфере (рН 7,5), а затем отмывают в аналогичном растворе на магнитной мешалке в течение 10 минут.

Фрагменты фильтра просушивают на бумаге, вновь помещают раз­дельно в лунки планшета, к каждому сегменту фильтра добавляют рабочее разведение антикроличьей люминесцирующей сыворотки и инкубируют при комнатной температуре в течение 30 минут.

Споласкивают в фосфатно-солевом буфере (рН 7,5), затем отмывают в аналогичном растворе при помощи магнитной мешалки в течение 10 минут.

Подсушивают кусочки фильтра на бумаге, помещают все три фраг­мента на предметное стекло, наносят на них по капле забуференного глице рина, покрывают покровным стеклом и исследуют при помощи люминес­центного микроскопа как при методе эпифлуоресцеиции.

При исследовании антисыворотку M.hyopneumoniae необходимо про­верить на перекрестные реакции с M.flocullate. При обнаружении реагиру­ющих антител проводят адсорбцию сыворотки: 10 мл антисыворотки M.hyopneumoniae смешивают с центрифугатом 100 мл бульонной культу­ры M.flocullate, смесь выдерживают 1 час при 37° С, ночь при 4° С, центри­фугируют, над осадочная жидкость представляет собой адсорбированную иммунную сыворотку.

Обычно идентификацию микоплазм осуществляют методом флуо­ресцентного окрашивания колоний на агаровой среде Friss или на мемб­ранных фильтрах. Тест ингибиции роста также может быть использован для этой цели, но из-за штаммовых антигенных различий результат может быть неоднозначным.

Идентификацию культур M.hyosynoviae осуществляют на основании изучения признаков, а также в тесте инги­биции роста, иммунофлуоресцентного окрашивания колоний на агаровой среде или микроколоний на мембранных фильтрах.

Инкубационный период обычно составляет 7-10 суток, диагностичес­кий убой целесообразно проводить через 15-20 суток. Из клинических симптомов наиболее типичен кашель, температурная реакция может быть слабой или совсем отсутствовать. В положительных случаях в легких об­наруживают характерные изменения, подтверждением служит реизоляция культур, наличие серологического ответа.

Методы серологической диагностики инфекций M.hyorhinis и M.hyosynoviae не разработаны. Серодиагностику микоплазмозной пневмонии свиней используют в основном как групповой метод, наи­более апробирована с этой целью РСК. Иммунопероксидазный тест более чувствителен, но менее специфичен.