Серологическая диагностика. Биопроба. При диагностике респираторного микоплазмоза биопробу проводят для вы­деления культуры возбудителя

Биопроба. При диагностике респираторного микоплазмоза биопробу проводят для вы­деления культуры возбудителя, а также для подтверждения патогенных свойств выделенной культуры микоплазм. Исследуемый материал вводят 7-9-дневным куриным эмбрионам в хориоаллантоисную полость в объеме 0,2 мл. Исследуют эмбрионы, погибшие через 48 часов и позднее после зара­жения. В положительных случаях обнаруживают отеки и кровоизлияния на коже головы, тела, лапках, застойные и дегенеративные изменения в парен­химатозных органах, отеки и кровоизлияния в околоплодных оболочках, аэросаккулиты, пневмонию. Обычно эмбрионы погибают на 5-7-е сутки. Однако часто требуется один или более пассажей, прежде чем наступают характерные изменения и гибель эмбрионов. При первичном заражении за положительный результат принимают гибель 50% и более зараженных эмб­рионов при выживании контрольных.

Выделяемых от птиц

Примечание: аэробно/анаэробно; н.д. — нет данных; d — варьирукющий признак.

Гемагглютинирующими свойствами обладают М.gallisepticum, M. sinoviae, M. iowae и иногда некоторые штаммы М. melagridis.

Серологическую идентификацию М.gallisepticum, M. synoviae, М.melagridis обычно осуществляют при помощи кроличьих антисыворо­ток в реакциях эпифлуоресценции, РДП, тесте ингибиции роста. Штаммы М. gallisepticum, M. sinoviae, M. melagridis и другие микоплазмы птиц име­ют внутривидовые варианты антигенных свойств, что может быть выявле­но путем электрофореза белков в полиакримидном геле.

При диагностике инфекции, вызванной возбудителем М.synoviae заражают бульонной культурой интраплантарно, интраартикулярно цыплят, индюшат и через 3-5 недель в РПГА или РДП регистрируют появление в крови антител к возбудителю, что позволяет типировать изолированную культуру. Заражение куриных эмбрионов вызывает их гибель на 4-14-е сутки.

Испытание патогенных свойств М. meleagridis показало штаммовую вариабельность вирулентных свойств возбудителя. При заражении куль­турой возбудителя куриных эмбрионов гибели не наблюдают. В резуль­тате заражения 7-14-дневных эмбрионов у 30-70% вылупившихся ин­дюшат обнаруживают патологические изменения.

Штаммы М. iowae варьируют по вирулентным свойствам, некоторые штаммы вызывают гибель куриных и индюшиных эмбрионов при зараже­нии в желточный мешок.

Серологические тесты применяют при диагностике болезней, обусловлен­ных М. gallisepticum, M. sinoviae, M. melagridis. Серологические реакции, из-за низкого титра антител, практически не используют для диагностики М. iowae — инфекции.

Реакция агглютинации на стекле. Используют РА на стекле со свежей кровью или сывороткой крови. Ис­пользуют окрашенные антигены
М. gallisepticum, M. sinoviae, M.melagridis. На предметном стекле смешивают 0,02 мл исследуемой сыворотки и 0,03 мл антигена, компоненты перемешивают в течение 2-3 минут и учитывают результат по общепринятой системе.Зараженная птица становится серопозитивной через 7-
10 дней после инфицирования. Чувствительность и специфичность реакции зависят от метода изготовления антигена.

Возможно наличие ложных положительных реакций после применения-гетерологичных эмульгированных вакцин. При оценке эпизоотической ситуации в хозяй­ствах обследуют приблизительно 5-10% поголовья. Положительная РА у 50% птиц и более указывает на наличие инфекции М. gallisepticum.

Для подтверждения результатов исследование разведен­ных сывороток крови. Агглютинация в титрах 1:8-1:10 и более оценива­ется как положительный результат. Результаты пластинчатой РА также подтверждают в реакции ингибиции гемаглютинации.

Реакция торможения гемагглютинации (РTГА). При помощи РТГА определяют зараженность родительского стада кур, наличие антител в сыворотке крови суточных цыплят, желтке яиц после удаления липидов. РТГА более специфич­на, но менее чувствительна, чем РА на стекле, причем при диагностике инфекции, вызываемой М. gallisepticum из-за внутривидовой антигенной гетерогеннос­ти антигены из разных штаммов могут не выявлять антитела к другим штам­мам. Реакцию ставят, используя антиген в количестве четырех гемагглютинирующих единиц, титр 1:40-1:80 и бо­лее оценивают как положительный результат.

Иммуноферментный метод. Используют твердофазный ИФА для диагностики инфекций, вызываемых М. gallisepticum, M. sinoviae, M. melagridis, хотя, видимо из-за характеристик антигенов, регистрируются случаи ложных положительных реакций.