Серологическая диагностика. Для ретроспективной диагностики хламидиозов животных используют РСК, РДСК, ИФА

Для ретроспективной диагностики хламидиозов животных используют РСК, РДСК, ИФА. Абортировавших животных исследуют на нарастание титра антител (положительный результат — увеличение титра антител в 4 раза и более). Животных, вакцинированных против хламидийного аборта, не исследуют в течение 12 месяцев.

РСК ставят в объеме 1 мл (по 0,2 мл каждого компонента) или в микро­варианте по общепринятой схеме. Комплемент, разведенный 1:20, титруют с дозы 0,02 до 0,2 мл с интервалом 0,02 мл. Гемолизин используют в удво­енном титре, эритроциты в виде 2,5%-ной, а для РДСК — 3%-ной взвеси. Группоспецифический хламидийный антиген берут в рабочем тит­ре, указанном на коробке. Сыворотки крови исследуют в разведениях 1:5 и 1:10. Предварительно испытуемые и контрольные сыворотки разводят 1:5, инактивируют при 56-60° С, в зависимости от вида животного, в течение 30 минут. Первую фазу РСК проводят в водяной бане при 37-38° С в тече­ние 30 минут, вторую фазу — 20 минут.

Контроли главного опыта РСК: позитивная сыворотка в разведении 1:5 без антигена и с контрольным антигеном; в разведениях от 1:5 до предель­ного титра — со специфическим антигеном; негативная сыворотка в разве­дениях 1:5 и 1:10 со специфическим антигеном в разведении 1:5 с конт­рольным антигеном и без антигена; контроль антигенов на антикомплемен-тарность: специфический и контрольный антиген в двойной дозе + компле­мент + гемсистема; контроль антигенов на гемотоксичность: специфичес­кий и контрольный антиген в двойной дозе + гемсистема, комплемент не добавляют.

При постановке РДСК первую фазу проводят при 2-6° С в течение 16-18 часов, вторую фазу — 20 минут при 37-38° С.

Комплемент используют в рабочем разведении 1:25 или 1:30.

Варьирующим компонентом является гемолитическая система, ее тит­руют на позитивной, негативной и одной из исследуемых сывороток. Для этого при проведении второй фазы РДСК гемсистему берут в дозах от 0,1 мл до 1 мл, с интервалом 0,1 мл. Сыворотки для титрования гемсистемы раз­водят и добавляют остальные компоненты одновременно с исследуемыми сыворотками.

При оценке результатов РСК и РДСК за положительный результат при­нимают задержку гемолиза на 2-4 креста в разведении сыворотки 1:10; сомнительный — задержка на 1 крест в сыворотке, разведенной 1:10, и на 1-4 креста в сыворотке, разведенной 1:5.

Для диагностики хламидиоза свиней из-за присутствия неполных (бло­кирующих) антител вместо классической РСК и РДСК рекомендуется при­менять реакцию непрямого связывания комплемента (РНСК, РПСК). В ре­акцию вводят дополнительный компонент (позитивная сыворотка, содер­жащая полные антитела) и поэтому общий объем компонентов реакции со­ставляет не 1 мл, а 1,2 мл.

Иммуноферментный метод применяют с использованием коммерческо­го диагностического набора, включающего специфический хламидиозный антиген, специфическую хламидиозную сыворотку, отрицательную сыворот­ку, пероксидазный антивидовой конъюгат и необходимые химические реа­генты. Реакцию проводят по общепринятой схеме. Исследуют парные сыворотки крови в разведениях 1:200-1:6000. Результат реакции учитывают через 30-40 минут после вне­сения стоп-раствора. При визуальном учете в положительном случае наблю­дают оранжево-коричневое окрашивание, как и в позитивном контроле. В отрицательных пробах цвет реакционной смеси не меняется или имеет сла­бую желтую окраску, как в отрицательном контроле. При спектрофотомет-рическом учете используют специальные фотометры с вертикальным лучом при длине волны 490 нм. Результаты выражают в единицах оптической плот­ности (ОП490). Положительными считаются пробы, ОП490 которых в два и более раза превосходит уровень оптической плотности отрицательного кон­троля. Сомнительные пробы — пробы, у которых ОП490 составляет 0,150-0,1999 оптических единиц. Уровень оптической плотности ниже 0,150 еди­ниц свидетельствует об отрицательной реакции. Основанием, согласно на­ставлению по диагностике хламидиозов, для постановки предварительного диагноза считается увеличение титра антител в парных сыворотках в 2-4 раза. Сыворотки, давшие сомнительный результат, исследуют повторно. Животных, с сыворотками крови которых получены положительные и со­мнительные результаты, исследуют повторно прямыми методами диагности­ки для постановки окончательного диагноза.