Фотометрический метод
Определение фактора XIII
Исследование фактора XIII следует проводить в тех случаях, когда у больного имеются проявления кровоточивости, но при этом ПВ, АЧТВ и тесты на первичный гемостаз нормальные. Среди ориентировочных и скрининговых тестов на недостаточность ф.ХIII может указать только тромбоэлас-тограмма, на другие тесты дефицит ф.ХIII практически не влияет. В то же время дефицит ф.ХIII имеет выраженные клинические проявления и может быть причиной кровотечений неясной этиологии у человека на фоне полного здоровья, геморрагического синдрома при ДВС, гиперфибринолизе, после
удаления миндалин, при патологии печени и кост-но-мозгового кроветворения. Дефицит ф.ХIII может быть врожденным и приобретенным, в том числе в результате появления аутоантител. Определение дефицита ф.ХIII и его причины необходимо для назначения адекватного лечения, в частности использования концентратов фактора XIII. Для определения врожденного дефицита ф.ХIII используются иммунохимические методы, в том числе ELISA, применяется ПЦР-диагностика для геноти-пирования врожденных мутаций. Однако ф.ХIII -это высокополиморфный белок, определение его
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ
структурных компонентов часто бывает недостаточным, поэтому требуются функциональные тесты с определением активности ф.ХIII.
Фактор XIII - фермент трансглютаминаза, которая образует поперечные сшивки между пептидами. При этом изопептидные связи образуются между остатками глютамина и лизина, в реакции освобождается аммиак. Последний определяется в ферментной реакции с глютаматдегид-рогеназой (ГлДГ) и α-кетоглютаратом, кофактором реакции является НАДН, окисляющийся до НАД (рис. 108). Измерение проводится фотометрически при длине 340 нм, метод может выполняться на биохимических анализаторах.
Разработан новый метод определения фактора XIII, основанный на введении субстрата в
иммобилизированный белок, которое обеспечивается фактором ХIIIа. Раньше иммобилизовался казеин. В новом методе используется физиологический субстрат-фибрин. Фактор ХIIIа инкорпорирует субстрат 5-(биотинамидо)-пен-тиламин (БАПА) в фибрин, который определяется количественно с конъюгатом стрептави-дин-щелочная фосфатаза (рис. 109). Инкорпорирующий метод позволяет оценивать физиологическую роль мутации Val34Leu фактора XIII, которая сочетается с риском внутричерепных кровоизлияний и кровотечений из внутренних органов. В то же время больные с этой мутацией фактора XIII практически не страдают инфарктом миокарда и венозными тромбозами. Мутацию Val34Leu фактора XIII не выявляет фотометрический метод. Инкорпорирующий метод может с успехом использоваться для мо-ниторирования больных с очень низким уровнем ф.ХIII, что бывает при наследственных дефицитах.
Рис. 108. Принцип определения фактора XIII фотометрическим методом
Рис. 109. Принцип определения фактора XIII инкорпорирующим методом. БАПА - 5-(биотинамидо)-пентиламин, ЩФ-щелочная фосфатаза
Обеспечение диагностики нарушений гемостаза в КДЛ