Электрофорез

Ультрацентрифугирование

Этот метод основан на различной скорости седиментации (осаждения) белковых молекул в растворах с различным градиентом плотности (сахарозный буфер или хлорид цезия) (рис. 2.2).

Рис. 2.2. Разделение белков методом ультрацентрифугирования

Данный метод основан на различной скорости миграции белков и пептидов в электрическом поле в зависимости от заряда. Носителями для электрофореза могут служить бумага, крахмал, ацетатцеллюлоза, агар и другие гели.

Гель-электрофорез. Разделяемые молекулы движутся в геле в зависимости от их размера и формы: те из них, которые имеют бóльшие размеры, будут задерживаться при прохождении через поры геля. Следовательно, после проведения электрофореза бóльшие молекулы будут находиться ближе к старту, чем меньшие (рис. 2.3).

Рис. 2.3. Разделение белков методом электрофореза в геле

Методом электрофореза можно разделить белки и по молекулярной массе. Тогда его проводят в полиакриламидном геле в присутствии додецилсульфата натрия (ДДС-Na).

ДДС-Na является дифильной молекулой и содержит заряженную и гидрофобную группы. Белки связываются с ДДС-Na своими гидрофобными радикалами и при этом денатурируют. Таким образом, белки выравниваются по форме и заряду. После этого подвижность белка при электрофорезе будет зависеть только от его молекулярной массы.

ДДС-Na