double arrow

Работа № 1. Определение концентрации глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом


Принцип метода.Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием пероксида водорода, при разрушении которого под влиянием пероксидазы происходит конденсация фенола и p-аминоантипирина в окрашенное соединение. Реакция протекает по схеме:

Глюкоза + О2 + Н2О ¾¾¾¾¾¾¾¾® глюконат + Н2О2;

глюкозооксидаза

2О2 + фенол + 4-аминоантипирин -¾¾® 4(n-бензохинонмоно- + 4Н2О.

(п-аминофеназон) пероксидаза имино)-феназон

(цветной хиноимин)

Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в крови.

Ход работы:1. В пробирки внести реактивы в соответствии с указанными объемами:

Отмерить, мл Опытная проба Стандартная проба Контрольная проба
Сыворотка крови 0,02 - -
Стандартный раствор глюкозы - 0,02 -
Дистиллированная вода - - 0,02
Реактив для определения глюкозы 3,0 3,0 3,0

Пробы перемешивают и инкубируют 30 мин. в термостате при 370С. Измеряют оптическую плотность опытной (Е1) и стандартной пробы (Е2) против контрольной в кювете 0,5 см, при длине волны 480-520 нм. Измерение должно быть проведено до истечения 5 минут.

Содержание глюкозы определяют путем расчета по формуле:

С глюкозы (ммоль/л) = Е12 ×10

Сопоставить с нормой содержания у здоровых людей и сделать вывод.







Сейчас читают про: