Работа № 1. Определение концентрации глюкозы в сыворотке крови глюкозооксидазным методом

Принцип метода. Глюкоза в присутствии фермента глюкозооксидазы окисляется кислородом воздуха с образованием пероксида водорода, при разрушении которого под влиянием пероксидазы происходит конденсация фенола и p-аминоантипирина в окрашенное соединение. Реакция протекает по схеме:

Глюкоза + О₂ + Н₂О ¾¾¾¾¾¾¾¾® глюконат + Н₂О₂;

^{глюкозооксидаза}

2Н₂О₂ + фенол + 4-аминоантипирин -¾¾® 4(n-бензохинонмоно- + 4Н₂О.

(п-аминофеназон) ^{пероксидаза} имино)-феназон

(цветной хиноимин)

Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в крови.

Ход работы: 1. В пробирки внести реактивы в соответствии с указанными объемами:

Пробы перемешивают и инкубируют 30 мин. в термостате при 37⁰С. Измеряют оптическую плотность опытной (Е₁) и стандартной пробы (Е₂) против контрольной в кювете 0,5 см, при длине волны 480-520 нм. Измерение должно быть проведено до истечения 5 минут.

Содержание глюкозы определяют путем расчета по формуле:

С глюкозы (ммоль/л) = Е₁/Е₂ ×10

Сопоставить с нормой содержания у здоровых людей и сделать вывод.