Работа № 3. Количественное определение гликозаминогликанов в коже

О количестве гликозаминогликанов в тканях судят по содержанию одного из компонентов – гексуроновых (глюкуроновой и идуроновой) кислот, выделяемых кислотным гидролизом. Продукты гидратации гексуроновых кислот дают окрашенные соединения с карбазолом.

Ход работы. Измельчить ножницами 0,1 г кожи, растирать в ступке, добавляя щепотку кварцевого стекла и 1 мл 0,5 н раствора соляной кислоты. Гомогенат ткани перенести в пробирку, смывая 4 мл 0,5 н раствором соляной кислоты. Пробирку поставить на 20 мин в кипящую баню, охладить и профильтровать. 1 мл фильтрата перенести в чистую пробирку и при охлаждении в воде со льдом (снегом) прибавить 6 мл концентрированной серной кислоты. Осторожно (!) перемешать, охладить и затем поставить в кипящую баню еще на 20 мин. Пробирку охладить, добавить 0,2 мл 0,2% раствора карбазола в 96% этаноле и перемешать. Пробирку вновь поставить в кипящую баню на 20 мин. Развивается фиолетово-красное окрашивание. Через 10 мин содержимое пробирки колориметрировать на ФЭКе против концентрированной серной кислоты при зеленом светофильтре в сухих кюветах толщиной 10 мм. По калибровочному графику найти содержание гексуроновых кислот и рассчитать содержание в ткани гликозаминогликанов.

Расчет: допустим, экстинкция (Е) равна 0,14. По калибровочному графику эта экстинкция соответствует содержанию гексуроновых кислот 0,036 мг (С). Количество гликозаминогликанов (мг) в 100 г кожи находят по формуле:

Х= (5×С)×1,92×100/0,1, где

С - количество гексуроновых кислот (мг) в 1 мл гидролизата;

(5×С) – количество гексуроновых кислот (мг) в 5 мл гидролизата или 0,1 г кожи;

1,92 – коэффициент, соответствующий содержанию гексуроновых кислот в гликозаминогликанах;

0,1 г – навеска взятой ткани.

Норма. Содержание гликозаминогликанов в 100 г кожи равно 345,6 мг.