Иммуноферментный и радиоиммунный анализ: сущность, условия, направления, способы постановки и учета, диагностическое значение

Иммуноферментный анализ. Этот метод для выявления,как АГ с помощью соответсвующих им АТ, конъюгированных с ферментом, так и АТ сыворотки крови больного.

Способ постановки:

Реакцию ставят в лунках полистероловых пластин. Разведение сыворотки проводят микропипетками.

При выявлении АГ к нему добавляют соответствующие АТ, конъюгированы ферментом-меткой. После соединения АГ с меченной ферментом иммунной сыворотки в смесь добавляют субстрат-хромоген. Субстрат расщепляется ферментом и изменяет цвет реакции. Результат учитывают спектрофотометрически.

Применяют для бактериальных, паразитарных и вирусных болезней(ВИЧ, гепатит В…)

Радиоиммунный анализ. Радиоиммунный анализ (РИА) является чрезвычайно чувствительным методом, который мо­жет быть использован для количественного определения лю­бого антигена. Чувствительность метода позволяет выявлять незначительные количества антигена.

Для проведения жидкостного радиоиммунного анализа очи­щенный известный антиген метят радионуклидами, чаще всего ¹²⁵1. В этом случае используют конкурентный вариант связы­вания, когда для определения количества антигена в исследу­емом образце оценивают его способность конкурировать с меченым референс-антигеном в связывании со специфическими антителами. Образующиеся комплексы антиген—антитело выде­ляют осаждением (сульфатом аммония или антиантителами) и определяют их радиоактивность в сопоставлении с радиоактив­ностью несвязанного антигена в надосадочной жидкости. Ис­пользование ряда концентраций немеченого антигена позволяет построить стандартную калибровочную кривую, с помощью которой определяется концентрация исследуемого антигена.

Более современный метод — твердофазный РИА, при кото­ром специфические антитела фиксируются на твердой фазе, к ним добавляется исследуемый антиген, а затем меченый стан­дартный антиген. Определение связанной и несвязанной метки позволяет построить калибровочную кривую и определить ко­личество исследуемого антигена.

РИА широко применяют для количественного определения

различных веществ: гормонов (инсулина, гормона роста, адренокортикотропного гормона, трийодтиронина, тироксина, эст­рогена), белков сыворотки крови (IgE, а-фетопротеина и др.), метаболитов (фолиевой кислоты, циклических нуклеотидов и др.), лекарственных препаратов (дигоксина, дигитоксина, мор­фина), микробных антигенов (HBsAg).