Сложные реакции называются так потому, что состоят из нескольких простых реакций.
Реакция связывания комплемента (РСК) предложена Ж. Бордё и О. Жангу. Реакция включает две фазы. В фазе I (специфической) искомый Аг (или AT) реагирует с диагностической антисывороткой (или Аг-диагностикумом) и комплементом. Образующийся комплекс Аг-АТ связывает комплемент. В фазе II (индикаторной) определяют наличие свободного комплемента внесением в реакционную среду гемолитической системы — эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, содержащей AT к ним. Если Аг и AT не соответствуют друг другу и не образуют иммунных комплексов, то связывания комплемента не происходит. В этом случае свободный комплемент взаимодействует с компонентами гемолитической системы, фиксируясь на комплексе эритроцит-антиэритроцитарное AT. Следствие этого — гемолиз индикаторных клеток (феномен «лаковой крови») — реакцию считают отрицательной. Если в фазе I AT и Аг соответствуют друг другу, то образующиеся иммунные комплексы связывают комплемент, разрушения эритроцитов после внесения гемолитической системы не наблюдают и реакцию считают положительной.
|
|
Основные недостатки РСК: сложность (включает 5 компонентов), лабильность некоторых компонентов [их необходимо готовить прямо перед постановкой реакции (комплемент) либо за несколько суток (эритроциты барана)] и возможные антикомплементарные свойства у сывороток и Аг. Тем не менее РСК применяют в диагностике многих заболеваний, например при диагностике сифилиса (реакция Вассерманна).
Реакция радиального гемолиза в геле — вариант РСК. Принцип реакции основан на иммобилизации комплемента и Аг (эритроциты барана) в агаровом геле. Затем в геле нарезают лунки и вносят AT (например, гемолитическую сыворотку). Диффундирующие AT связывают Аг и комплемент, что проявляется появлением зон гемолиза. Их размеры пропорциональны титрам AT в сыворотке. В диагностических целях эритроциты барана «нагружают» Аг различных возбудителей (например, вирусов гриппа, краснухи), а в лунки вносят сыворотку больных.
Реакция локального гемолиза в геле предложена Н. Йёрне и А. Нордином (1963). Принцип аналогичен реакции радиального гемолиза, но в гель вносят эритроциты барана и суспензию клеток-антителопродуцентов. Последние секретируют AT, диффундирующие в агар и фиксирующиеся на эритроцитах. Затем в реакционную систему вносят комплемент (наслаивая его на агар) и наблюдают образование зон гемолиза вокруг каждой клетки, образующей AT к эритроцитам барана. Метод получил широкое распространение во многих областях иммунологии, так как даёт возможность оценивать образование AT на уровне отдельных тканей и клеточных популяций после различных воздействий. Метод позволяет определять динамику образования антителообразующих клеток к различным Аг, связывая их с эритроцитами, а также определять классы образуемых Ig.
|
|
Определение принадлежности AT к тому или иному классу Ig имеет большое диагностическое значение, так как позволяют определить фазу инфекционного процесса. На базе классических серологических реакций доступна унитиоловая проба, в основу которой положена способность унитиола расщеплять дисульфидные (S-S) мостики в молекулах IgM, но не IgG. Первоначально в порции сыворотки определяют общие титры AT (например, в РИГА), затем в неё вносят унитиол и после инкубации снова определяют титры AT. Разницу между титрами первого и второго измерения составляют титры IgM.