III. Перечень возможных заданий лабораторного практикума

Задание 1. Определение количества гемоглобина.

Необходимые животные и оборудование на 1 рабочее место:

1. Кролик с постгеморрагической анемией (постгеморрагическую анемию у кролика вызывают за 4 - 5 дней до занятия кровопусканием из бедренной артерии) в количестве 2% от массы тела.

2. Кролик с гемолитической анемией (гемолитическую анемию у кролика вызывают подкожным введением за 5-6 дней до занятия 2,5% раствора фенилгидразина солянокислого в количестве 0,6 мл на кг массы в течение 3 дней).

3. Пробирки.

4. Инъекционная игла.

5. Вата – 5 г.

6. Трансформирующий реагент (смесь солей: калия железосинеродистого, цианида натрия и гидрокарбоната натрия) – 5 мл.

7. Капилляр (0,02 мл).

8. Фотоэлектрокалориметр.

9. Резиновые перчатки.

10. Калибровочный раствор гемиглобинцианида.

Цианметгемоглобиновый фотометрический метод.

Принцип метода основан на образовании из гемоглобина крови стойкого соединения - гемиглобинцианида, интенсивность окраски которого пропорциональна количеству гемоглобина. Реакция проходит в 2 этапа: сначала гемоглобин окисляется в метгемоглобин под действием калия железосинеродистого, затем под действием цианида метгемоглобин преобразуется в гемиглобинцианид.

Ход исследования.

Кровь от животного (кролика) с экспериментальной анемией набирают из краевой вены уха в капилляр (0,02мл), затем переносят в пробирку, добавляют 5,0 мл трансформирующего реагента (разведение крови 1:250), перемешивают и через 30 минут измеряют оптическую плотность на ФЭК против трансформирующего реагента при температуре 18-25^о С, длине волны 540 нм и использовании кювет с длиной оптического пути 10 мм. Калибровочный раствор гемиглобинцианида измерить при этих же условиях в неразбавленном виде. Расчет гемоглобина провести по формуле:

Гемоглобин (г/л) =Еоп / Ек х С х К х 0,001.

где: Еоп – оптическая плотность опытной пробы;

Ек – оптическая плотность калибровочного раствора гемиглобинцианида;

С – концентрация гемиглобинцианида в калибровочном растворе в мг/л (603 мг/л)

К – коэффициент разведения крови (250)

0,001 – коэффициент пересчета мг/л в г/л

Нормальное содержание гемоглобина у мужчин 132-173 г/л, у женщин 120-160 г/л.