Метод Хайденхайна

Техника.

Реактивы. 1) Жидкость Шаудина: делают смесь 1 объема 96° этилового спирта с 2 объемами насыщенного раствора сулемы; к этой смеси непосредственно перед употреблением приливают ледяную уксусную кислоту в количестве 3-5% к общему объему. Смесь употребляют слегка нагретой (до появления паров). 2)Спирт этиловый 70-96°. 3) Спирт-йод – 70° этиловый спирт, к которому добавлена настойка йода до красноватого цвета. 4) Железо-аммониевые квасцы, 2,5-4% водный раствор. 5) Раствор гематоксилина: 1 г кристаллического гематоксилина растворяют в 10 мл 96° этилового спирта и доливают до 100 мл дистиллированной водой: настаивают на свету при комнатной температуре 2-3 недели.

Жидкость Шаудина наносят на нефиксированный мазок на 2-5 минут. Затем мазок помещают в 70° этиловый спирт на 2 минуты, смесь этилового спирта с йодом на 2 минуты и снова в этиловый спирт на 2 минуты. Мазок промывают дистиллированной водой в течение 2 минут и помещают в раствор железо-аммониевых квасцов на сутки. Через сутки мазки быстро ополаскивают дистиллированной водой, дают стечь воде и переносят в раствор гематоксилина на сутки. После этого мазки промывают водопроводной водой в течение 5 минут и далее дифференцируют 2% раствором квасцов.

Дифференцирование является наиболее трудным моментом. Его цель – удаление излишка краски для выявления структуры простейших. Оно проводится под контролем микроскопа. С препарата осторожно удаляют осадок краски и наливают раствор квасцов. Дифференцирование прекращают, когда протоплазма отдаст излишек краски, и появятся четкие контуры клеток. После этого препарат промывают проточной водой и подсушивают.

Микроскопическая картина. На серо-лиловом фоне цитоплазмы клеток отчетливо видны черные хроматиновые элементы ядер.

Окраска йодом и йод-эозином

Используется для окраски нативных мазков амеб и их цист.

Техника. Для приготовления мазка используют раствор Люголя, приготовленный следующим образом: в 100 мл дистиллированной воды сначала растворяют 2 г йодистого калия, а затем 1 г кристаллического йода. Жидкость хранят в склянке темного стекла.

Йод-эозин (по Дональдсону): смешивают равные объемы насыщенного раствора кристаллического йода в 5% водном растворе йодистого калия и насыщенного водного раствора желтого (водорастворимого) эозина.

Микроскопическая картина. Цисты и вегетативные клетки приобретают четкие контуры коричневого оттенка.