Окрашивание генциановым фиолетовым и конго красным

Применяют для всех видов грибов.

Техника. Препарат фиксируют любым спо­собом, помещают в 0,5%-ный водный раствор генцианового фио­летового на 1,5-2 мин, промывают, помещают в 0,5%-ный водный раствор конго красного на 2-3 мин, промывают, подсушивают.

Микроскопическая картина. Оболочки окрашиваются в темно-синий или черный цвет

Окрашивание хитиновых веществ

Метод Висселинга

Техника. Препарат кипятят в концентрированной щелочи в течение часа, промывают, нейтрализуют серной кисло­той до получения нейтральной реакции. Затем добавляют две капли раствора йода в йодистом калии и несколько капель раз­веденной серной кислоты.

Микроскопическая картина. Хитин окрашивается в ярко-фиолето­вый цвет.

Определение хитина и хитозана в мицелии

Техника. Отфильтрованный мицелий помещают в аппарат Сосклета для удаления жира эфиром и, если надо, пигмента. Пигмент удаляют спирто-бензолом (1:4) затем отмывают до полного исчезновения спирто-бензола, заливают 4-5%-ным едким натром и кипятят в водяной бане 3-4 ч, после чего проверяют на белок биуретовой реакцией.

Для этого к 5-6 мл раствора добавляют такое же количество 10%-ного раствора щелочи, хорошо взбалтывают, после чего добавляют 2-3 капли 3%-ного раствора сернокислой меди и слабо нагревают; белок окрашивается в фиолетовый цвет.

Если реакция отрицательная, то мицелий отмывают от щелочи до нейтральной реакции и обра­батывают 50%-ным едким натром при 140°С в течение 1-2 ч. Проверяют наличие хитозана качественной реакцией со слабым раствором йода; хитозан окрашивается в фиолетовый цвет.

Да­лее препарат заливают 1-2%-ной уксусной кислотой, в которой хитозан растворяется. После окончательного растворения хито­зана, о чем судят по исчезновению фиолетовой окраски, оста­ется хитин, который окрашивается слабым раствором йода в ин­тенсивный коричневый цвет. Для количественного определения полученный материал заливают абсолютным спиртом на 2-3 ч, высушивают в вакууме при 40°С и гидролизуют концентрированной соляной кислотой. Затем определяют количество редуцирующих сахаров (методом Хагедорна-Йенсена).

Окрашивание ядерного аппарата