2015-02-27
2536
| Ингредиент | Номер пробирки | |||
| Опыт | Контроль комплемента | контроль гемолитической сыворотки | Контроль эритроцитов | |
| Гемолитическая сыворотка в разведениях 1:600, 1:1200, 1:1600 и т.д. | 0,5 | 0,5 | – | – |
| Взвесь эритроцитов барана | 0,5 | 0,5 | 0,5 | 0,5 |
| Комплемент в разведении 1:10 | 0,5 | – | 0,5 | – |
| Изотонический раствор натрия хлорида | – | 0,5 | 0,5 | 1,0 |
Термостат при температуре 37ºС в течение 1 ч
Титрование комплемента. Перед проведением опыта основной раствор комплемента (1:10) разливают в ряд пробирок от 0,05 до 0,5 мл и добавляют в каждую изотонический раствор натрия хлорида, доводя объем жидкости до 1,5 мл. Пробирки помещают в термостат при температуре 37ºС на 45 мин, затем добавляют в них гемолитическую систему и выдерживают в термостате в течение 30 мин, после чего определяют титр комплемента.
Для опыта берут рабочую дозу комплемента (содержащуюся в объеме 0,5 мл), которая выше титра на 20-30%.
Схема титрования комплемента
| Ингредиент, мл | Номер пробирки | |||||||||||
| Контроль | ||||||||||||
| Комплемент в разведении 1:10 | 0,05 | 0,1 | 0,15 | 0,2 | 0,25 | 0,3 | 0,35 | 0,4 | 0,45 | 0,5 | 0,5 | - |
| Изотонический раствор натрия хлорида | 1,45 | 1,4 | 1,35 | 1,3 | 1,25 | 1,2 | 1,15 | 1,1 | 1,05 | 1,0 | 1,5 | 1,5 |
Термостат при температуре 37ºС в течение 45 мин
|
|
|
| Гемолитическая система | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 1,0 | 0,5 | 1,0 |
Термостат при температуре 37ºС в течение 30 мин
Титрование антигена. Антигены, используемые для РСК могут адсорбировать какое-то количество комплемента, т.е. обладать антикомплементарными свойствами. Поэтому перед проведением опыта антигены титруют в присутствии рабочей дозы комплемента. В меньшей степени антикомплементарные свойства выражены у специфических антигенов, выпускаемых производственным путем. Их титр определяют не перед каждым опытом, а один раз в месяц, учитывая возможность его уменьшения в процессе хранения.
Для определения титра антигена его разливают в ряд пробирок в уменьшающемся количестве от 0,5 до 0,05 мл, доводя объем в них до 1 мл путем добавления раствора натрия хлорида. Затем в каждую пробирку добавляют 0,5 мл рабочей дозы комплемента и помещают их в термостат на 1 ч при температуре 37ºС. После этого во все пробирки добавляют по 1 мл гемолитической системы, снова выдерживают их в течение 1 ч в термостате и учитывают результаты реакции.
Титром антигена считают наименьшее его количество, при котором наступает полный гемолиз. Для РСК используют рабочую дозу антигена, составляющую примерно 1/2-1/3 титра. Антигены, в присутствии которых титр комплемента уменьшается более чем на 30%, непригодны для реакции.
