Опыт № 5 Фагоцитоз птичьих эритроцитов в перитонеальном экссудате морской свинки (опыт И.И. Мечникова)

За сутки до занятия морской свинке вводят внутрибрюшинно 8‑10 мл стерильного мясо-пептонного бульона. При этом возникает асептическое воспаление, в перитонеальном экссудате скапливается большое количество макрофагов. Во время занятия морской свинке внутрибрюшинно вводят 5-8 мл 5% птичьих эритроцитов, подогретых до +38°С. Птичьи эритроциты являются объектом фагоцитоза.

Через 30-40 минут после введения птичьих эритроцитов у подопытного животного ножницами делают небольшой (3-5 мм) разрез кожи живота по средней линии. В месте разреза стерильной пастеровской пипеткой прокалывают брюшную стенку. В силу капиллярности перитонеальный экссудат заполняет пипетку. Из этого экссудата готовят 2 препарата: 1 – висячую каплю; 2 – фиксированный мазок.

Приготовление висячей капли

3-5 капель экссудата помещают на часовое стекло и смешивают с 1 каплей краски «нейтральрот» (нейтральный красный). На покровном стекле делают ободок из вазелина, а в центре его помещают каплю экссудата, смешанного с краской. Покровное стекло накрывают предметным стеклом с лункой. Затем весь препарат переворачивают покровным стеклом вверх, при этом капля экссудата повисает над лункой. Рассматривая препарат под малым увеличением, среди массы желтоватых эритроцитов находят красноватые комочки – макрофаги морской свинки, в которых уже идут процессы фагоцитоза. Поставив такой комочек в центр поля зрения, подробно рассмотреть его под большим увеличением, при этом можно наблюдать все стадии фагоцитоза птичьих эритроцитов макрофагами морской свинки.

«Нейтральрот» – индикатор, принимающий в кислой среде красный цвет. Следовательно, красноватый цвет приобретает протоплазма тех макрофагов, где уже идут процессы переваривания фагоцитированных клеток под воздействием ферментов макрофага.

Приготовление мазка

Каплю экссудата наносят на предметное стекло и с помощью стекла со шлифом делают мазок. Высохший мазок фиксируют в смеси Никифорова 15-20 минут или в метиловом спирте 3 минуты. Затем мазок заливают краской Романовского на 20-25 минут, смывают водой и, высушив, рассматривают под микроскопом с иммерсионной системой. Зарисовывают все стадии фагоцитоза.

Занятие 10. Лихорадка