2015-04-30
2501
СУБ Компании определяется ее политикой. Политика Компании – это документ, определяющий цели и задачи Компании, а также методы и средства достижения безопасной эксплуатации судов и предотвращения загрязнения окружающей среды (рис. 5).
| Общая политика Компании |
| СУБ судна |
| СУБ Компании |
Рисунок 5 – Концепция Системы Управления Безопасностью
Структура Компании должна обеспечивать выполнения требований СУБ (рис. 6).
| Экипаж судна |
| Группа внутреннего аудита СУБ Компании |
| Президент Компании |
| Назначенное лицо на берегу |
| Капитан судна |
| Делегирование полномочий |
| Рабочая группа по МКУБ |
Рисунок 6 – Ключевые лица СУБ Компании и их взаимосвязи
Ответственность, полномочия и взаимодействия всего персонала судов и береговых подразделений должны быть четко определены и доведены до каждого (рис. 7).
У Б - Б Е Р Е Г | Президент Компании | ||
Назначенное
| |||
| Корректирующие | |||
| Выработка решения | |||
| Обсуждение | |||
| |||
| Сбор |
| Несоответствия, статистика, отчеты |
Рисунок 7 – Схема функционирования СУБ между берегом и судном
Топливные и масляные сепараторы
Центробежный сепаратор. Топливо и смазочные масла перед их использованием в дизеле необходимо обработать. Для этого применяются отстаивание и подогрев с целью удаления воды, грубая и тонкая фильтрация для удаления плотных частиц, а также сепарация.
Центробежный сепаратор используется для разделения двух жидкостей, например топлива и воды, или для разделения жидкости и твердых (плотных) частиц, которые встречаются в масле. Разделение этих сред ускоряется с помощью центробежного сепаратора и может осуществляться непрерывно. Если сепаратор предназначен для разделения двух жидкостей, его называют пурификатором (очистителем). Если сепаратор устроен (собран) так, что может выделять примеси и небольшое количество воды из топлива или масла, то его называют кларификатором (тонким очистителем-осветлителем).
Удаление примесей и воды из топлива имеет большое значение для обеспечения хорошего сгорания топлива. Благодаря удалению загрязняющих примесей из смазочного масла удается уменьшить изнашивание деталей дизелей и предотвратить возможные неполадки и поломки. Поэтому сепарация масла и топлива совершенно необходима.
Центробежный сепаратор состоит из электродвигателя с вертикальным валом. В верхней части сепаратора смонтирован барабан. На корпусе, в котором помещен барабан, расположены различные питательные (входные) и нагнетательные (выпускные) трубопроводы. Барабан может быть цельным и работать периодически. В нем скапливаются отсепарированные примеси, которые необходимо периодически удалять.
|
|
|
В других конструкциях барабан имеет раздельные верхнюю и нижнюю половины. В этом случае отсепарированные примеси можно удалять из работающего сепаратора, т. е. не выключая его. При этом неочищенное (загрязненное) топливо поступает в центральную часть барабана, поднимается вверх по пакету (набору) дисков (тарелок) и выходит из барабана в верхней его части (рис. 1).
Рис. 1. Устройство и принцип работы барабана центробежного сепаратора, собранного по принципу: а - пурификации (очистителя); б - кларификации (осветителя); 1 - слой шлама; I - подача в барабан неочищенного топлива; II - отвод из барабана очищенного топлива; III - отвод из барабана отсепарированной из топлива воды.
Процесс пурификации. В результате центробежного разделения двух жидкостей, таких как топливо и вода, образуется цилиндрическая поверхность раздела между ними. Расположение этой поверхности раздела внутри барабана имеет очень большое значение для нормальной эффективной работы сепаратора. Устойчивое требуемое расположение поверхности раздела фаз поддерживается посредством применения регулировочных шайб или гравитационных дисков (тарелок) соответствующего диаметра, устанавливаемых на выпускном канале из сепаратора. Эти кольца и шайбы различного диаметра имеются в наличии для каждого сепаратора, чтобы можно было подобрать шайбу или кольцо соответствующего размера в зависимости от плотности сепарируемого топлива. Чем меньше плотность сепарируемого топлива, тем больше должен быть внутренний диаметр регулирующей шайбы.
Процесс кларификации. Его применяют для очистки топлива, которое мало содержит или совсем не содержит воду. При этом удаляемые из топлива примеси скапливаются в грязевой камере, расположенной на периферии барабана. Барабан кларификатора имеет только одно выпускное отверстие (Рис. 2). Гравитационные диски здесь не применяют, так как поверхность раздела жидких фаз не образуется. Поэтому барабан работает с максимальной разделяющей способностью, так как топливо подвергается воздействию максимальной центробежной силы.
Рис. 2. Продольный разрез барабана самоочищающегося сепаратора: I - удаление из барабана примесей, сепарированных из топлива; II - подвод рабочей воды, управляющей открытием и закрытием грязевой камеры барабана.
Тарелки барабана. Барабаны пурификаторов и кларификаторов содержат каждый по пакету конических дисков (тарелок). В каждом таком пакете может быть до 150 тарелок, отделенных одна от другой небольшим зазором (просветом). Процесс отделения примесей и воды из топлива происходит между этими тарелками. Ряды центрированных отверстий, расположенных в каждой тарелке около ее наружной кромки, служат для поступления в межтарельчатые пространства грязного топлива, т. е. топлива, подлежащего обработке. Под действием центробежной силы легкие компоненты (чистое топливо) перемещаются к оси вращения барабана, а вода и примеси (более тяжелые компоненты) отбрасываются к периферии барабана, т. е. к его стенкам. Вода и примеси образуют отстой (шлам), который движется к периферии барабана вдоль нижних сторон (поверхностей) тарелок.
Периодическая работа сепаратора. Некоторые сепараторы сконструированы так, что имеют непродолжительный период работы. Затем их выключают для очистки отсепарированных примесей (плотных частиц). После очистки тарелок и удаления шлама из барабана сепаратор опять включают. При такой периодической работе используются барабаны двух различных конструкций: длинный узкий и короткий широкий барабаны. Для сепараторов с узким барабаном требуется очистка после непродолжительного периода работы. Для этого барабан необходимо разбирать. Очистка такого узкого барабана, не имеющего пакета тарелок, намного проще, чем барабана с тарелками. Сепаратор с широким барабаном и с тарелками можно чистить на месте, хотя и имеются дополнительные трудности в очистке пакета конических тарелок.
|
|
|
Непрерывная работа сепаратора. Сепараторы с широкими барабанами современных конструкций могут эффективно работать в течение длительного периода. Это достигается путем выброса (выстреливания) через определенные промежутки времени шлама из барабана. Шлам скапливается по периферии барабана в процессе непрерывной его сепарации из топлива. Через определенные промежутки времени шлам выбрасывается из барабана наружу, прежде чем он начнет отрицательно влиять на процесс сепарации топлива. В начале процесса выброса шлама (автоматическая очистка барабана) подачу топлива в сепаратор прекращают и топливо, оставшееся в барабане, удаляют впуском промывочной воды. Вода заполняет гидравлическую систему, расположенную в нижней части барабана, и открывает пружинные клапаны. Затем под воздействием воды движется вниз подвижная нижняя часть барабана. В результате этого открываются выпускные окна, расположенные по периферии барабана в его средней части. Шлам выталкивается через эти окна центробежной силой. Затем под воздействием воды поднимается подвижная часть барабана опять вверх (в исходное положение). В результате этого выпускные окна закрываются. Затем в барабан подается вода для восстановления жидкостного уплотнения (водяного затвора), необходимого для процесса сепарации. После этого возобновляют подачу в сепаратор необработанного топлива и процесс сепарации продолжается.
Выброс шлама длится всего несколько секунд и сепаратор при этом работает непрерывно. В существующих конструкциях сепараторов применяются разные способы удаления шлама из барабана, например полное удаление, частичное управляемое удаление и т. д. При частичном управляемом удалении подачу топлива в сепаратор не прекращают и весь шлам выталкивается. При этом процесс сепарации непрерывен. Какой бы метод сепарации не применялся, но сепаратор должен быть устроен так, чтобы процесс удаления шлама осуществлялся или вручную, или посредством автоматического программного регулятора (таймера).
|
|
|
Техническое обслуживание сепаратора. Барабан и пакет тарелок нуждаются в периодической очистке, если сепаратор сконструирован без подвижных поршневых затворов, т. е. с несамо-очищающимся барабаном. При разборке барабана должны быть приняты меры предосторожности. Следует пользоваться только специальным инструментом, предназначенным для этой цели.
Нужно учитывать, что у некоторых деталей сепаратора имеются резьбы левого вращения (против часовой стрелки). Барабан является точно сбалансированным устройством, имеющим высокую частоту вращения. Поэтому все его детали должны быть тщательно осмотрены и подогнаны.
Сепарация смазочного масла циркуляционных систем дизелей. Смазочное масло при циркуляции в дизеле загрязняется частицами изнашивающихся деталей, продуктами сгорания топлива и водой. В данном случае для непрерывного удаления из масла этих примесей применяются центробежные сепараторы, работающие по принципу пурификации.
Пропускание большого количества масла, циркулирующего в системе, т. е. всего потока масла, будет стоить слишком дорого. Поэтому применяется байпасная система, при которой загряз-ненное масло забирается из нижней части картера сточной масляной цистерны, в отдаленном от всасывающего патрубка месте и возвращается очищенным в месте, расположенном вблизи от всасывающего патрубка. Так как это байпасная (перепускная) система, то следует руководствоваться принципом: меньшая загрязненность масла, содержащегося в циркуляционной системе, будет при работе сепаратора со значительно меньшей производительностью по сравнению с паспортной (максимальной).
По желанию можно принять схему очистки масла с промывкой его водой во время сепараци. Однако некоторые масла содержат водорастворимые присадки, которые будут утеряны, если такое масло промывать водой.
Преимущество промывки масла водой в процессе сепарации заключается в том, что происходит растворение и удаление водорастворимых кислот, улучшается процесс сепарации, так как плотные частицы увлажняются и непрерывно обновляется гидравлический водный затвор в барабане. Промывочная вода должна иметь температуру подогрева немного большую, чем температура масла.
Детергентные масла также пригодны для сепарации. Их применяют в тронковых дизелях и в некоторых малооборотных двигателях. Присадки к детергентным маслам обычно растворимые в масле и не могут вымываться водой в процессе сепарации с промывкой.
Сепарация смазочного масла для паровых турбин. Смазочное масло для паровых турбин загрязняется примесями из циркуляционной системы и водой при конденсации пара. Поэтому для очистки масла, циркулирующего в системе, применяется байпасная центробежная сепарация. Загрязненное масло забирается из нижней части масляной цистерны, а очищенное масло возвращается в место около всасывающего насоса. Предварительный подогрев масла перед сепарацией улучшает процесс очистки. По согласованию с заводом-изготовителем или поставщиком масло можно промывать водой.
Подготовка топлива в судовых условиях
Эксплуатационные показатели судов, надежность и эффективность эксплуатации дизелей могут быть существенно улучшены путем проведения на судах комплексной обработки горюче-смазочных веществ с помощью соответствующих систем подготовки и очистки, состоящих из отстойных цистерн, подогревателей, центробежных сепараторов, фильтров, гомогенизаторов, устройств для ввода химических присадок и др.
Необходимость и важность проведения работ по очистке и подготовке к использованию топлива и масла подтверждаются требованиями Правил технической эксплуатации (ПТЭ) дизелей.
В топливе содержатся различные примеси: вода, соединения серы, соли различных металлов, механические примеси.В процессе подготовки топлива к сжиганию производится очистка его от примесей. Очистка осуществляется отстаиванием, сепарацией, фильтрацией и гомогенизацией.
Наиболее эффективным способом очистки дизельных и тяжелых топлив в судовых условиях является сепарация, при которой более тяжелые частицы отделяются под действием центробежных сил, возникающих при вращательном движении топлива в сепараторе.
Силы тяжести, действующие при отстое на механические примеси и воду, содержащиеся в высоковязких топливах, очень невелики, а расстояние, которое эти вредные вещества должны проходить при оседании на дно резервуара, велико. Поэтому эффективность отстоя невысока.
При сепарации центробежная сила во много тысяч раз превосходит силу тяжести, следовательно, и эффект очистки очень высок. Так как расстояние, которое примеси должны проходить в барабане сепаратора при отделении от топлива, значительно меньше, чем при отстое в цистерне, то процесс сепарации является почти мгновенным.
Рис. 1. Отстой и сепарация нефтепродукта: а - неподвижная цистерна; б - цистерна, вращающаяся с большой скоростью.
На рис.1 приведены два эскиза цилиндрической плоскодонной цистерны, содержащей смесь нефтепродукта (топлива), воды и механических примесей. Неподвижная цистерна (рис. 1, а) на ¾ заполнена указанной смесью, а поступление потока смеси через питательный трубопровод 1 прекращено. Все три компонента смеси стали разделяться под действием силы тяжести (отстой). Механические примеси 4 осели на дно топливо 2 всплыло наверх, а вода 3 заняла промежуточное положение. Цистерна вращается с большой скоростью относительно вертикальной оси, и содержимое подвергается действию центробежной силы (Рис. 1, б). В результате этого все три компонента занимают примерно такое же положение, как при отстое. В связи с тем, что центробежная сила пропорциональна массе тела, механические примеси 4, которые в данном случае являются самыми тяжелыми, занимают дальнее положение от центра вращения, а топливо 2, которое является самым легким, располагается ближе к центру вращения цилиндра. Между ними располагается слой воды 3, который имеет промежуточную плотность.
Если по питательному трубопроводу 1 непрерывно подается смесь, то такое же количество чистого топлива непрерывно выходит через горловину цистерн (барабана). Этот метод удаления жидкости без остановки вращающегося барабана применен в сепараторах.
Прежде чем часть смеси выходит через горловину из цилиндра, она проходит путь, начиная со дна цилиндра и до его верха. При этом она все время подвергается действию центробежной силы, и самые тяжелые частицы смеси отбрасываются от центра вращения на самое дальнее расстояние. Поэтому часть содержимого, выходящая непрерывно через горловину барабана вследствие вытеснения дополнительной смесью, поступающей через питательный трубопровод, является чистым нефтепродуктом.
Для сокращения расстояния, проходимого тяжелыми частицами смеси до того, как они отделятся от более легких частиц, смесь в барабане разделяют на тонкие слои посредством множества конических дисков, расстояние между которыми около 1...5 мм (рис. 2). Конические диски вращаются вместе с барабаном.
Рис. 2. Схема движения механических примесей, воды и очищенного топлива между дисками барабана сепаратора.
В тонких слоях топлива, расположенных между каждой парой конических дисков, содержатся частицы механических примесей и воды. Центробежная сила стремится отбросить их в направлении от оси вращения барабана, т. е. к его внутренней поверхности. Однако движению частиц в этом направлении препятствуют нижние поверхности дисков, следовательно, частицы механических примесей и вода вынуждены сползать вниз по этим поверхностям, как показано стрелками 2.
Очищенное топливо как более легкий компонент смеси, наоборот, стремится занять более близкое положение к оси вращения барабана. Но так как движению очищенного топлива в перпендикулярном направлении препятствует верхняя сторона каждого диска, то под напором вновь поступающей жидкости топливо проталкивается по зазорам между дисками вверх к выходу из барабана, как показано стрелками 1, т. е. в направлении, противоположном движению твердых частиц и воды. Подвод очищаемого нефтепродукта осуществляется через отверстия 3 в сепарационных (конических) дисках. Линия «у — у» — раздел жидких фаз — воды и нефтепродукта.
В процессе очистки механические примеси и вода собираются в кольцевом пространстве 4 (грязевой камере), образуемом пакетом дисков и внутренней поверхностью корпуса барабана, причем вода, двигаясь вверх и проходя над верхним коническим диском, как показано стрелкой 5, удаляется из сепаратора, а механические примеси оседают на внутренней поверхности барабана.
Сепараторы можно применять для очистки нефтепродуктов методами пурификации и кларификации.
Пурификация — это сепарирование, при котором от топлива отделяются грязь и вода.
Когда в топливе содержится мало воды, но загрязнение его значительно, применяют способ кларификации, при котором от топлива отделяются твердые примеси.
Барабаны сепараторов фирмы «Де Лаваль», собранные для работы в режимах пурификации и кларификации, показаны на рис. 3.
Рис. 3. Барабаны топливных сепараторов: а - пурификатор; б - кларификатор.
Пурификатор (рис. 3, а) имеет распределитель А, по которому необработанное топливо подается к дискам через имеющиеся в них распределительные отверстия 1 и 3. Здесь между дисками начинается сепарация топлива. Вода удаляется по каналу, образуемому верхним диском и крышкой барабана, через кольцевое отверстие. Очищенное топливо отводится тоже через кольцевое выпускное отверстие, но расположенное значительно ближе к оси вращения барабана. Механические примеси (шлам) отбрасываются как наиболее тяжелые частицы к периферии и оседают на внутренней стенке барабана.
Барабан-кларификатор, в отличие от пурификатора, имеет не два, а одно кольцевое выпускное отверстие, предназначенное только для отвода из сепаратора очищенного нефтепродукта (рис. 3, б). Топливо, прошедшее грубую очистку в пурификаторе, или неочищенное, не содержащее воду, подводится по распределителю А, так же как в пурификаторе, к нижней части барабана. Однако в отличие от пурификатора нефтепродукт не пропускается через отверстия в дисках, так как они заглушены вставкой, а направляется в обход нижней кромки распределителя, поступая к наружным концам дисков.
Далее начинается процесс тонкой очистки нефтепродуктов, который аналогичен процессу, происходящему в пурификаторе. Очищенное топливо движется в междисковых пространствах снизу вверх от периферии по направлению к оси вращения барабана и по каналу через кольцевое отверстие отводится наружу. Все отсепарированные из нефтепродуктов примеси остаются в грязевой камере.
Таким образом, так как в кларификаторе самый нижний диск не имеет распределительных отверстий, все вышележащие диски как бы экранизируются от поступающего в барабан топлива. Следовательно, топливо, подвергающееся кларификации, вынуждено двигаться к наружным концам этих дисков прежде, чем начнет перемещаться вверх и внутрь к оси вращения барабана. Топливо будет проходить в кларификаторе большее расстояние и находиться в барабане дольше. Следовательно, очистка будет более качественной.
Таким образом, кларификатор отличается от пурификатора только внутренним устройством барабана. Если необходимо, барабаны этих двух сепараторов можно приспособить так, что пурификатор будет работать как кларификатор, и наоборот. Например, достаточно в пурификаторе регулировочную шайбу 2 заменить крышкой, заглушить отверстия 1 и заменить верхний диск, как барабан может работать в режиме кларификации.
При работе по методу кларификации сепаратор запускают с сухим барабаном. После того как скорость вращения барабана достигнет необходимого значения, его постепенно наполняют топливом.
Перед работой по методу пурификации барабан сепаратора заполняют водой, нагретой до температуры очищаемого топлива. Налитая вода образует так называемый водяной затвор, обеспечивающий непрерывный отвод воды. Количество воды, содержащееся в водном затворе, может уменьшаться вследствие испарения или по другим причинам.
Сепаратор работает нормально до тех пор, пока вертикальная линия соприкосновения между топливом и водяным затвором не переместится по направлению к стенке барабана до канала для выпуска воды, образованного удлиненным верхним конусным диском и крышкой барабана. С этого момента топливо начнет выходить из отверстия для выпуска воды.
Качество очистки и количество топлива в отходах зависят от величины внутреннего диаметра регулирующей шайбы. Поэтому к каждому сепаратору прилагается комплект регулирующих шайб с различными внутренними диаметрами, которые подбирают в зависимости от плотности сепарируемого топлива. При нормальных условиях эксплуатации сепаратора содержание топлива в отсепарированной воде не должно превышать 1%.
Метод пурификации целесообразно применять при наличии в топливе 3% и более воды и незначительного количества механических примесей (менее 0,3%). Методом кларификации рекомендуется пользоваться тогда, когда в топливе мало воды, но загрязнение его механическими примесями значительно.
Если топливо сильно обводнено и засорено механическими примесями, то применяют двухступенчатый метод очистки двумя сепараторами, включенными последовательно. Сначала топливо пропускают через сепаратор, собранный на работу по методу пурификации, а затем через кларификатор. Работа пурификатора и кларификатора, соединенных последовательно, считается нормальной, если в первом удаляется из топлива 85% примесей, а во втором 15%.
Механические примеси, скапливающиеся в грязевой камере сепаратора, удаляются оттуда вручную, причем сепаратор необходимо остановить. Очистка барабанов и дисков требует много времени и труда. Поэтому в последнее время находят все более широкое применение так называемые самоочищающиеся сепараторы, которые можно очищать без вскрытия, что создает большие удобства в эксплуатации и повышает производительность и ресурс сепараторов. Из самоочищающихся сепараторов грязевые отложения удаляют через периодически открываемые или постоянно открытые щели в барабане.
Нефтепродукт, подлежащий сепарации, поступает в барабан самоочищающегося сепаратора по трубопроводу 13 (рис. 4). Очищенный нефтепродукт отводится по трубопроводу 11. Так как барабан работает по способу кларификации, его горловина закрыта крышкой 12. Грязевая камера 10 выполнена конусообразной. В корпусе барабана по окружности расположены окна 2, закрытые в рабочем положении подвижным поршнем (фальшднищем) 3. Под поршнем имеется камера 4, заполненная водой, подаваемой из отдельной цистерны по трубопроводу 7.
Рис. 4. Барабан самоочищающегося сепаратора.
При вращении барабана центробежная сила, действующая на содержимое барабана, стремится его открыть, т. е. опустить подвижное днище 3 вниз. Однако оно удерживается в верхнем положении напротив уплотнительного кольца 1 давлением воды, создаваемым тоже под действием центробежной силы в камере 4.
Перед очисткой барабана подачу рабочей воды переводят из камеры 4 в камеру 5, переключая ее с трубопровода 7 на трубопровод 8. В результате этого в камере 5 создается давление, которое отжимает кольцо 6 вниз, и через открывшиеся клапаны 9 рабочая вода вытекает из камеры 4. После этого подвижное днище 3, освобожденное от давления воды в камере 4, отжимается вниз центробежной силой содержимого барабана на долю секунды и шлам из грязевой камеры выталкивается наружу через выпускные окна 2.
Таким образом, шлам из грязевой камеры удаляется автоматически, путем открытия выпускных окон при полных оборотах барабана.
Кроме дисковых сепараторов, применяют сепараторы роторного (трубчатого) типа.
Частота вращения роторов в сепараторах трубчатого типа 200...750 с-1 (12000...45000 об/мин), в сепараторах дискового типа 67... 150 с-1 (4000...9000 об/мин).
Для эффективной сепарации тяжелые топлива необходимо предварительно подогревать до определенной температуры и снижать производительность сепаратора. Маловязкие топлива сепарируют без подогрева при полной производительности сепаратора, средневязкие — с подогревом до 75...85°С при производительности 30% полной, а высоковязкие — с подогревом до 96...98°С при производительности не более 15% полной. Повышение температуры более 98°С недопустимо, так как возникает опасность разрушения водяного затвора в сепараторе.
Каждая сепарационная установка должна иметь трубопровод горячей воды, подача которой в сепаратор необходима для прогревания его перед пуском и для промывания барабана во время очистки. Вместо горячей воды рекомендуется применять водные растворы химических моющих препаратов, например раствор химического препарата «Поликлепс».
Метод сепарации имеет и недостатки. Так, снижение механических примесей и воды сопровождается потерями горючей части топлива — тяжелых ее компонентов. Эти потери могут достигать 2...3% (в ряде случаев до 6...8%). Кроме того, подогрев топлива усиливает окислительные процессы, в результате в топливе повышается содержание смолистых веществ.
В последние годы в связи с увеличением плотности применяемых топлив метод сепарации утрачивает свое значение как универсальный метод. Это объясняется сложностью отделения воды от топлива (плотности их мало отличаются) и изменением отношения эксплуатационников к содержанию воды в топливе. Установлено, что в топливе повышенной и высокой вязкости при-сутствие воды в тонкодисперсном состоянии (в виде топливоводяных эмульсий) не вредно (как считалось ранее), а полезно, так как при сжигании такой эмульсии повышается полнота сгорания топлива. В связи с этим из топлива повышенной вязкости можно воду не удалять (при содержании воды не более 5%).
Маловязкие топлива необходимо освобождать от воды, так как образование в них топливоводяных эмульсий затруднительно. Воду из вязких топлив необходимо удалять только при аварийных ее содержаниях (более 5%) и очистку можно производить не с помощью сепараторов, а путем фильтрации. Необходимо удалять из топлива морскую воду при любом ее содержании.
Очистка топлива сепараторами не исключает необходимости применения в системах фильтров. Это объясняется тем, что механические частицы, размер которых колеблется от 1 до 10 мкм, не отделяются при сепарировании.
Практичне заняття №2
1. ОБЩИЕ ПОЛОЖЕНИЯ
1.1. Настоящие Методические указания предназначены для специалистов санитарно-эпидемиологических станций, осуществляющих государственный санитарный надзор за судами морского, смешанного (река - море) и внутреннего плавания СССР и другими плавучими объектами и сооружениями, и регламентируют порядок и методы контроля гигиенической эффективности судовых установок очистки и обеззараживания сточных вод (ООСВ) в рамках предупредительного и текущего санитарного надзора.
1.2. Контролю подлежат отечественные установки ООСВ на стадиях опытного производства и производства установочной серии, находящиеся в эксплуатации на судах, а также установки зарубежного производства, одобренные Министерством здравоохранения СССР и Регистром СССР.
1.3. При оценке гигиенической эффективности работы установок ООСВ следует руководствоваться следующими нормами очистки и обеззараживания судовых сточных вод, сбрасываемых в водные объекты после установок:
┌────────────────┬───────────────┬──────────────┬────────────────┐
│ Наименование │ Стенд │ Морские суда │Суда внутреннего│
│ показателя │ предприятия- │ │ и смешанного │
│ │ изготовителя │ │ плавания │
├────────────────┼───────────────┼──────────────┼────────────────┤
│Биохимическое │не более │не более │не более 50 мг/л│
│потребление │50 мг/л │50 мг/л │ │
│кислорода (БПК)│ │ │ │
│ 5 │ │ │ │
│ │ │ │ │
│Взвешенные │не более │не более │не более 50 мг/л│
│вещества (ВВ) │50 мг/л │100 мг/л сверх│ │
│ │ │содержания ВВ │ │
│ │ │в промывочной │ │
│ │ │воде │ │
│ │ │ │ │
│Лактозоположи- │не более 1000 │не более 2500 │не более 1000 │
│тельные кишечные│ │ │ │
│палочки │ │ │ │
│(коли-индекс) │ │ │ │
│ │ │ │ │
│Остаточный хлор │в пределах │в пределах │в пределах │
│<*> │1,5 - 5,0 мг/л │1,5 - 5,0 мг/л│1,5 - 5,0 мг/л │
└────────────────┴───────────────┴──────────────┴────────────────┘
--------------------------------
<*> Определяется непосредственно после установки в случаях применения для обеззараживания хлорсодержащих реагентов или использования безреагентных методов образования и подачи в установку активного хлора.
1.4. При наличии санитарно-эпидемиологических показаний при контроле за установками ООСВ должны определяться дополнительные показатели в соответствии с "Методическими указаниями по гигиеническому контролю загрязнения морской среды" N 2260-80, "Методическими указаниями по санитарно-микробиологическому анализу воды поверхностных водоемов" N 2285-81, "Инструктивно-методическими указаниями по лабораторной диагностике холеры" N 04-23/3 от 12.09.83.
1.5. Ответственность за выпуск установок ООСВ, отвечающих требованиям технических условий, согласованных с органами здравоохранения в установленном порядке, а также организацию стендовых испытаний несет предприятие-изготовитель; за монтаж, наладку, приемочные испытания на борту судна - судостроительные и судоремонтные предприятия; за техническое обслуживание и обеспечение паспортных режимов работы установок в процессе эксплуатации на судне - администрация судна.
1.6. С изданием настоящих Методических указаний отменяется "Временное положение о порядке осуществления государственного санитарного надзора за судовыми установками для очистки и обеззараживания сточных вод" N 2931-83 от 01.09.83.
2. ОРГАНИЗАЦИЯ ПРЕДУПРЕДИТЕЛЬНОГО И ТЕКУЩЕГО
САНИТАРНОГО НАДЗОРА ЗА УСТАНОВКАМИ ООСВ
2.1. В порядке предупредительного санитарного надзора контроль за отечественными установками ООСВ осуществляют:
2.1.1. Министерства здравоохранения союзных республик, на территории которых расположены проектные организации - разработчики установок, или по их поручению бассейновые санэпидстанции на водном транспорте - при испытаниях опытных образцов, одного из образцов установочной серии, первого головного образца серийного производства установки на стенде завода-изготовителя и на борту судна.
2.1.2. Бассейновые, портовые, линейные санэпидстанции на водном транспорте - в процессе швартовных и ходовых испытаний судов при сдаче их в эксплуатацию после постройки или ремонта.
2.2. Испытания новых видов установок ООСВ, их модификаций проводятся по специальным программам, разрабатываемым проектными организациями и согласовываемым с министерствами здравоохранения союзных республик.
2.3. Контроль за установками ООСВ зарубежного производства при испытаниях на стенде предприятия-изготовителя или на борту судна осуществляется Министерством здравоохранения СССР или по его поручению Балтийской бассейновой санэпидстанцией совместно с Регистром СССР.
2.4. На основании результатов испытаний отечественных и зарубежных установок ООСВ Министерством здравоохранения СССР выдается разрешение на их применение на судах СССР.
2.5. Технические условия на серийное производство установок, одобренных Минздравом СССР, согласовываются министерствами здравоохранения союзных республик, на территории которых расположены организации - разработчики нормативно-технической документации.
2.6. К проведению испытаний новых видов отечественных установок ООСВ привлекается филиал научно-исследовательского института гигиены водного транспорта Минздрава СССР.
2.7. В порядке текущего санитарного надзора контроль за установками ООСВ осуществляется бассейновыми, портовыми и линейными санэпидстанциями на водном транспорте:
2.7.1. При ежегодном и очередном (4-летнем) освидетельствовании судна и водоохранного оборудования инспекциями Регистра СССР.
2.7.2. При обследовании судов в плановом порядке и по санитарно-эпидемическим показаниям, порядок которых определен "Методическими указаниями по организации и проведению текущего санитарного надзора за эксплуатирующимися судами и другими плавучими сооружениями" N 2639-82.
2.8. В процессе санитарно-гигиенического обследования судна в порядке текущего санитарного надзора специалистами санэпидстанций проводится обследование судовых сточных систем, установок ООСВ, контролируются условия водопотребления и водоотведения, проверяются записи в журналах технического обслуживания установок и режим их работы, устанавливается соответствие технических показателей работы установок их паспортным значениям.
2.9. Отбор проб сточных вод для лабораторных исследований производится только при условии обеспечения паспортного устойчивого режима работы установки.
2.10. При испытании на стенде предприятия-изготовителя и на борту судна опытных образцов установок, одного из образцов установочной серии и головного образца серийного производства отбирается по 40 проб исходных сточных вод и сточных вод после очистки и обеззараживания в течение 10 дней (ежедневно по 4 пробы до и 4 пробы после установки) после достижения устойчивого режима работы испытываемого оборудования.
Примечание:
1. На стенде предприятия-изготовителя должна использоваться в
качестве исходной сточная вода из городских (заводских) сетей
канализации со следующими показателями: БПК - не менее 400 мг/л,
взвешенные вещества - не менее 500 мг/л, коли-индекс - не менее
10.
2. Пробы сточных вод до и после установки отбираются последовательно с интервалом по времени, в течение которого сточные воды находятся в установке, т.е. времени полного цикла их очистки и обеззараживания.
2.11. В процессе испытания серийно изготавливаемых установок ООСВ на борту судна (первоначальное освидетельствование установок, имеющих Свидетельство о типовом испытании Регистра СССР) отбирается 8 проб очищенной и обеззараженной сточной воды после установки в течение 2 дней (по 4 пробы ежедневно).
2.12. При сдаче судна после ремонта или зимнего отстоя отбирается 3 пробы после установки с интервалом между отборами 1 час.
2.13. При ежегодном освидетельствовании Регистром СССР установок на морских судах, судах смешанного плавания и при обследовании судна по санитарно-эпидемическим показаниям отбирается 1 проба сточных вод после установки.
2.14. При очередном (4-летнем) освидетельствовании установки Регистром СССР отбирается 3 пробы после установки с интервалом между отборами 1 час.
2.15. При плановом углубленном санитарно-гигиеническом обследовании судна количество исследуемых проб сточной воды до и после установок ООСВ определяется программой обследования судна.
2.16. Отбор проб сточных вод для лабораторных исследований из установок ООСВ биологического действия производится только при достижении устойчивого режима работы установок, но не позднее 1 месяца после сдачи судна в эксплуатацию. На время до получения результатов лабораторного исследования сточных вод сброс их после установок в водоемы запрещается. Сточные воды должны собираться в накопительные цистерны, сдаваться на береговые или плавучие приемные сооружения.
2.17. Результаты обследования судовых сточных систем и установок ООСВ, если оно проводится самостоятельно, оформляются актом санитарного обследования (форма N 315 у).
2.18. Отбор проб сточной воды для лабораторных исследований производится из пробоотборных устройств на установках в соответствии с действующей нормативно-технической документацией на правила отбора проб для санитарно-химических и микробиологических исследований и оформляется актом (форма N 332 у). Результаты лабораторных исследований оформляются протоколами (форма N 325 у).
В случае получения результатов исследования сточных вод после отхода судна в рейс, они передаются радиограммами на борт судна для внесения в судовые санитарные журналы (книгу единого осмотра).
2.19. На основании оценки результатов испытаний опытных образцов, образцов установочной серии специалистами санэпидстанций составляется Заключение о гигиенической эффективности работы установок ООСВ, которые вместе с материалами испытаний передаются Министерству здравоохранения СССР (Приложения 1, 2).
2.20. По результатам обследований установок при сдаче судна в эксплуатацию после постройки (первоначальное освидетельствование) при плановом углубленном обследовании судна оформляется заключение (Приложение 3), которое передается администрации судна.
2.21. В случае, когда определяемые в лабораториях санэпидстанций показатели качества очищенных и обеззараженных сточных вод не соответствуют гигиеническим нормам, администрации судна предъявляется требование о запрещении пользования установкой и сбросе сточных вод в районах морей, где Конвенцией МАРПОЛ-73/78 устанавливаются особые ограничения, в пределах I пояса зоны санитарной охраны прибрежных районов морей, в акватории портов и в районах рейдовых стоянок судов, а также во внутренних водоемах страны.
2.22. Санэпидстанциями ведется учет и анализ результатов лабораторных исследований, санитарных обследований судовых сточных систем и установок ООСВ, на основании которого разрабатываются обоснованные предложения соответствующим службам пароходств, управлений рыбной промышленности, организациям - владельцам судов, проектным организациям, предприятиям - изготовителям установок, которые направлены на повышение гигиенической эффективности их работы.
3. МЕТОДЫ САНИТАРНО-ХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
СУДОВЫХ СТОЧНЫХ ВОД
3.1. Отбор, консервирование и хранение проб.
Для анализа отбирают 1 литр сточной воды в стеклянную бутыль, закрывающуюся корковой или стеклянной пробкой.
Условия консервации проб в зависимости от исследуемого компонента представлены в таблице:
┌────────────────────┬───────────────────┬───────────────────────┐
│ Исследуемый │ Метод │ Начало анализа │
│ компонент │ консервации │ после отбора пробы │
├────────────────────┼───────────────────┼───────────────────────┤
│БПК │без консервации │через 3 часа │
│ 5 │охлаждение до +4 °C│через 24 часа │
│ │ │ │
│Взвешенные вещества │без консервации │через 4 часа │
│ │2 - 4 мл хлороформа│через 24 - 48 часов │
│ │ │(перед анализом │
│ │ │взболтать) │
│ │ │
│Остаточный активный хлор без консервации│на месте отбора пробы │
└────────────────────────────────────────┴───────────────────────┘
3.2. Определение содержания взвешенных веществ <*>.
--------------------------------
<*> "Методы определения вредных веществ в воде водоемов", М., "Медицина", 1981, с. 27.
При содержании взвешенных веществ в воде более 10 мг/л их определяют фильтрованием через беззольный бумажный фильтр "синяя лента".
Ход определения. Через подготовленный фильтр пропускают не менее 500 мл тщательно перемешанной сточной воды. Промывают колбу, в которой была проба, и осадок на фильтре небольшой порцией дистиллированной воды. Фильтр подсушивают на воздухе, затем помещают в бюкс и в открытом фильтре сушат при 105 °C в течение 2 часов, закрывают бюкс, охлаждают, взвешивают, повторяя операции до достижения постоянной массы (как при подготовке фильтров).
Содержание взвешенных веществ рассчитывают по формуле:
(M - M) x 1000
1 2
X = ----------------,
V
где:
X - содержание ВВ в мг/л;
M - масса бюкса с фильтром с высушенным осадком в мг;
M - масса бюкса с чистым высушенным фильтром в мг;
V - объем воды, взятой для анализа в мл.
3.3. Определение биохимического потребления кислорода БПК
(стандартный метод с разбавлением) <*>.
--------------------------------
<*> "Руководство по химическому анализу поверхностных вод суши", М., Гидрометеоиздат, 1977, с. 339.
Унифицированные методы исследования качества вод, СЭВ, 1977, с. 96.
Методика технологического контроля работы очистных сооружений городской канализации. М., Стройиздат, 1977, с. 60.
Определение производится в натуральной или разбавленной пробе по разности содержания кислорода до и после инкубации при температуре 20 °C, без доступа воздуха и света.
Перед анализом кислые воды нейтрализуют 0,1 н раствором едкого
натра (NaOH), щелочные - 0,1 н раствором серной кислоты (H SO).
2 4
Хлорированные сточные воды перед определением БПК
обрабатывают сульфитом натрия, количество которого определяют
титрованием. К 100 мл пробы прибавляют 10 мл H SO (1:50), 10 мл
2 4
раствора йодида калия (10% раствор) и титруют 0,025 н раствором
сульфита натрия Na SO с применением раствора крахмала в качестве
2 3
индикатора (раствор сульфита натрия приготавливают растворением
0,16 г безводного Na SO в 100 мл дистиллированной воды
2 3
непосредственно перед применением).
Для разбавления вод со значительным содержанием органических веществ применяют дистиллированную воду, полученную перегонкой в стеклянном перегонном аппарате, ее же применяют для приготовления растворов.
Разбавляющая вода должна быть насыщена кислородом и храниться в темноте, защищенной от каких бы то ни было загрязнений. В качестве питательных солей в нее вносят в день применения по 1 мл растворов (в расчете на 1 литр):
фосфатный буферный раствор, pH = 7,2. K HPO, х.ч., KH PO,
2 4 2 4
х.ч., Na PO x 7 H O, х.ч. NH Cl, х.ч.
2 4 2 4
8,5 г KH PO, 21,75 г K HPO, 33,4 г Na HPO x 7H O и 1,7 г
2 4 2 4 2 4 2
NH Cl растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до 1 л
(реактивы применяются химически чистые);
раствор сульфата магния MgSO x 7H O, х.ч.
4 2
22,5 г MgSO x 7H O растворяют в дистиллированной воде и
4 2
доводят до 1 л в мерной колбе;
раствор хлористого кальция CaCl, х.ч.
27,5 г CaCl безводного растворяют в дистиллированной воде и
доводят до 1 литра в мерной колбе;
раствор хлористого железа FeCl x 6H O, х.ч.
3 2
0,25 г FeCl x 6H O растворяют в дистиллированной воде и
3 2
доводят до 1 л в мерной колбе.
Затем к разбавляющей воде прибавляют 1 мл свежей хозяйственно-бытовой воды (сохранявшейся не более 24 час.) или 10 - 20 мл речной воды на каждый литр разбавляющей воды.
Исследуемую воду переливают в колбу и доводят до 20 °C (путем нагревания на водяной бане или охлаждения), после чего взбалтывают в течение 1 минуты для насыщения ее воздухом.
Дав выйти пузырькам воздуха, с помощью сифона наполняют 3 склянки с притертыми пробками водой наполовину, ополаскивают и потом наполняют до краев. В одной из них определяют растворенный кислород. Две других склянки с испытуемой водой ставят в термостат горлом вниз на 5 суток, по прошествии которых определяют оставшийся растворенный кислород.
Разность между начальным и конечным определениями, пересчитанная на 1 л, дает величину кислорода, пошедшего на окисление органических веществ в испытуемой воде в течение 5 суток.
Так как в случае загрязненных вод растворенного кислорода может не хватить для покрытия всей потребности воды в кислороде, то указанные воды необходимо перед началом определения разбавить разбавляющей водой. Разбавление должно быть таким, чтобы убыль кислорода за 5 суток была не менее 2 мг/л и чтобы остаток его по истечении этого времени не был ниже 2 мг/л.
Если БПК совершенно неизвестно, необходимо делать несколько
разбавлений, например 1:1, 1:4, 1:6 и т.д.
Разбавленную воду аэрируют путем взбалтывания, разливают по
склянкам и ведут в ней определение растворенного кислорода.
Для контроля необходимо производить определение БПК самой
разбавляющей воды с добавленными реактивами, оно не должно
превышать 0,3 мг О /л. Поправка вносится в расчет.
Ход определения. В кислородную склянку, заполненную доверху, прибавляют 2 мл раствора сульфата или хлорида марганца и 2 мл щелочного раствора йодида калия. После выпадения осадка гидроокисей марганца кислородную склянку открывают и пипеткой с широким концом, опущенным под уровень пробы, прибавляют 2 мл разбавленной (1:4) серной кислоты. Кислородные склянки вновь закрывают и, перевертывая, перемешивают их содержимое. Затем содержимое кислородной склянки переливают в колбу для титрования и ополаскивают склянку дистиллированной водой, сливая ее в ту же колбу.
Если для фиксации кислорода применялся раствор едкого калия без йодида, в колбу прибавляют еще 2 мл раствора йодида калия.
Через 5 минут содержимое колбы титруют раствором тиосульфата натрия.
Содержание растворенного кислорода в мг/л рассчитывают по формуле:
a x K x н x 8 x 1000
X = --------------------,
V - V
1 2
где:
a - количество тиосульфата, пошедшее на титрование в мл;
K - поправка для приведения концентрации раствора тиосульфата
к точно используемой концентрации;
н - нормальность раствора тиосульфата;
8 - эквивалент кислорода;
V - объем кислородной склянки;
V - общий объем реактивов, прибавленных в кислородную
склянку.
Расчет БПК без разбавления
X = а - в
X - БПК в мг/л кислорода;
а - содержание растворенного кислорода в воде до инкубации
в мг/л;
в - содержание растворенного кислорода в воде после инкубации
в мг/л.
Расчет БПК с разбавлением
X = ((А - В) - (а - в)) x N
X - БПК в мг/л кислорода;
А - содержание растворенного кислорода в воде до инкубации
в мг/л;
В - содержание растворенного кислорода в воде после инкубации
в мг/л;
а - содержание растворенного кислорода в разбавляющей воде до
инкубации в мг/л;
в - содержание растворенного кислорода в разбавляющей воде
после инкубации в мг/л;
N - величина разбавления (во столько раз разбавлена проба).
3.4. Определение содержания остаточного хлора (йодометрический
метод) <*>.
--------------------------------
<*> ГОСТ 18190-72 "Вода питьевая. Методы определения содержания остаточного активного хлора".
Ход определения. В коническую колбу насыпают 0,5 г йодистого калия, растворяют его в 1 - 2 мл дистиллированной воды, затем добавляют буферный раствор в количестве, приблизительно равном полуторной величине щелочности анализируемой воды, после чего добавляют 250 - 500 мл анализируемой воды.
Выделившийся йод оттитровывают 0,005 н раствором тиосульфата натрия из микробюретки до появления светло-желтой окраски, после чего прибавляют 1 мл 0,5-процентного раствора крахмала и раствор титруют до исчезновения синей окраски.
При определении щелочности воду предварительно дехлорируют с помощью тиосульфата натрия в отдельной пробе.
При концентрации хлора менее 0,3 мг отбирают для титрования большие объемы воды.
Содержание суммарного остаточного хлора (X), мг/л вычисляют по формуле:
y x K x 0,177 x 1000
X = --------------------,
V
где:
y - количество 0,005 н раствора тиосульфата натрия,
израсходованное на титрование, мл;
K - поправочный коэффициент нормальности раствора тиосульфата
натрия;
0,177 - содержание активного хлора, соответствующее 1 мл
0,005 н раствора тиосульфата натрия;
V - объем пробы воды, взятой для анализа, мл.
4. МЕТОДЫ САНИТАРНО-МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
ОЧИЩЕННЫХ И ОБЕЗЗАРАЖЕННЫХ СУДОВЫХ СТОЧНЫХ ВОД
4.1. Отбор, хранение и транспортировка проб воды.
Для бактериологического анализа пробы отбирают в местах выемки воды для химического анализа. В момент отбора проб измеряют температуру воды.
Пробу воды отбирают с соблюдением правил эпидемической безопасности в стерильные емкости в количестве не менее 0,5 литра. Пробы хлорированной воды отбирают в склянку, в которую до стерилизации вносят тиосульфат натрия из расчета 10 - 13 мг на 500 куб. см проб сточной воды.
Из одной точки в первую очередь отбирают пробы для микробиологических исследований, а затем для других целей. Посуду открывают непосредственно перед отбором, удаляя пробку вместе со стерильным колпачком. Во время отбора пробка и горлышко не должны чего-либо касаться. Ополаскивать посуду не следует.
После наполнения емкость закрывают стерильной пробкой, обеспечивающей герметичность (корковой, резиновой или ватной, обернутой фольгой и т.п.), и стерильным колпачком.
При невозможности проведения анализа на месте, отобранные пробы транспортируют в лабораторию в сумках-холодильниках или термоконтейнерах.
Во время перевозки пробы воды следует предохранять от замерзания, действия прямых солнечных лучей, избегать резких толчков, опрокидывания и замачивания пробок. Исследование воды должно быть произведено не позднее 6 часов с момента ее отбора при условиях хранения пробы при температуре +4 - +10 °C.
4.2. Аппаратура, лабораторная посуда, материалы, реактивы по ГОСТ 18963-73 "Вода питьевая. Методы санитарно-бактериологического анализа".
4.3. Метод мембранных фильтров.
Сущность метода заключается в концентрировании бактерий из определенного объема анализируемой воды на мембранный фильтр, выращивании их при температуре 37 °C +/- 0,5 °C на среде Эндо в течение 24 часов, дифференцировании выросших колоний и подсчете количества лактозоположительных кишечных палочек в 1 куб. дм воды. Данный метод является предпочтительным при анализе судовых сточных вод.
Объем воды выбирают в зависимости от степени ее предполагаемого загрязнения с расчетом, чтобы не менее чем на 2-х фильтрах выросли изолированные колонии, среди которых не более 30 колоний относятся к лактозоположительным кишечным палочкам. При этом можно ориентироваться на результаты предыдущих исследований, исходя из предполагаемой степени загрязнения сточных вод, времени, в течение которого сточные воды остаются в установке.
При исследовании воды неизвестной степени бактериального загрязнения следует засевать не менее 4-х десятикратных ее объемов (1,0; 0,1; 0,01; 0,001 куб. см).
Для фильтрования используют мембранные фильтры МФА-МА (фильтрующие мембраны "Владипор" N 5, 6 и 8 и предварительные N 10).
Подготовку мембранных фильтров к анализу осуществляют в соответствии с инструкцией завода-изготовителя.
Фильтрование воды выполняют с помощью специальных приборов с соблюдением правил стерильности. Фильтруют сначала меньшие, а затем большие объемы воды через 1 фильтровальный аппарат, меняя каждый раз фильтры. При фильтровании 1 куб. см воды в воронку наливают сначала 5 - 10 куб. см стерильной воды, а затем вносят анализируемую воду с последующим созданием вакуума.
После окончания фильтрования мембранный фильтр снимают при сохранении вакуума для удаления излишка влаги на нижней стороне фильтра. Фильтр переносят на среду Эндо, не переворачивая, и добиваются полного прилегания его к среде без пузырьков воздуха. На одну чашку можно помещать несколько фильтров, но с условием, чтобы они не соприкасались. Для посева используют среду Эндо с добавлением фуксина (на 100 куб. см среды прибавляют 0,1 - 0,2 куб. см 10% спиртового раствора основного фуксина).
Если анализируемая вода содержит большое количество взвешенных веществ или клеток фитопланктона, то ее фильтруют сначала через предварительный мембранный фильтр N 10 для удаления крупной взвеси, который помещают в фильтровальный аппарат, накладывая фильтр для бактериологического анализа. После окончания фильтрования фильтры переносят на среду Эндо раздельно и при выведении результатов анализа учитывают колонии, выросшие на обоих фильтрах.
Чашки с посевами помещают в термостат дном вверх и инкубируют при температуре 37° +/- 0,5 °C. К учету результатов приступают при отсутствии роста колоний - через 24 часа, при наличии колоний - через 18 часов.
Для учета выбирают фильтры, на которых выросли изолированные колонии и число колоний, характерных для лактозоположительных кишечных палочек, не более 30. Допустимо вести учет по одному фильтру или на фильтрах с более густым ростом, но с обязательной оговоркой в приложении к протоколу анализа.
Выполняют оксидазный тест. Мембранный фильтр с выросшими на нем колониями переносят на кружок фильтровальной бумаги несколько большего диаметра, чем фильтр, обильно смоченный реактивом для определения оксидазной активности. Оксидазный тест можно ставить с помощью СИБ-оксидазы, для чего мембранный фильтр с выросшими на нем колониями переносят пинцетом, не переворачивая, на бумажный диск СИБ-оксидазу диаметром 3,5 - 4 см (по наиболее принятому размеру фильтра), который предварительно рекомендуется смочить стерильной дистиллированной водой. Через 2 - 5 мин. после достаточного четкого проявления реакции (сине-фиолетовая окраска ободка или всей колонии оксидазоположительных бактерий) фильтр переносят обратно на среду и учитывают результат.
Все колонии, которые приобрели сине-фиолетовую окраску или синий ободок, из учета исключают. Среди колоний, не изменивших первоначального цвета (оксидазоотрицательных) подсчитывают количество красных и с металлическим блеском и без него, а также розовых слизистых крупных выпуклых, розовых с темно-красным центром (с отпечатками на обратной стороне фильтра, до выполнения оксидазного теста). Анализ может быть завершен на этом этапе.
В сомнительных случаях, когда необходимо подтвердить принадлежность колоний к лактозоположительным кишечным палочкам, а также при отсутствии реактива для оксидазной активности подсчитывают отдельно каждый тип колоний, которые по морфологии и окраске можно предположительно отнести к ферментирующим лактозу кишечным палочкам (темно-красные с металлическим блеском и без него, красные, розовые с красным центром, розовые выпуклые слизистые и других оттенков с отпечатками на обратной стороне мембранного фильтра). По 3 - 4 колонии каждого типа микроскопируют после окраски по Граму, пересевают в полужидкую среду с лактозой (уколом до дна) или в пептонную воду с СИБ-лактозой.
Посевы инкубируют в течение 4 - 5 часов при температуре 37 +/- 0,5 °C. При наличии кислоты и газа исследуемую колонию относят к ЛКП, при отсутствии изменения среды - не учитывают. При наличии только кислоты посев оставляют в термостате и окончательный учет производят через 24 часа.
Результат анализа выражают в виде коли-индекса - количество лактозоположителыных кишечных палочек в куб. дм воды. Суммируют количество колоний ЛПК на таких фильтрах, где выросло не более 30 изолированных колоний, и делят на объем профильтрованной воды, выраженный в куб. дм.
Например: если при посеве 1; 0,1; 0,01 и 0,001 куб. см воды на 4 фильтра на одном из них выросло 3 колонии, а на втором 5 колоний, то коли-индекс равен 35: 0,00111 куб. дм = 3154.
Примечание: при необходимости сохранения жизнеспособности бактерий, выросших на фильтрах, следует учитывать бактерицидность реактива для определения оксидазного теста. Поэтому высев колоний в полужидкую среду с лактозой и другие среды производят немедленно после проявления реакции и не позднее 5 - 7 мин. от начала контакта с реактивом.
4.3.2. Титрационный метод.
Объем воды для посева в лактозо-пептонную среду накопления выбирают с таким расчетом, чтобы в наименьших объемах получить один или несколько отрицательных результатов. При исследовании сточных вод можно ограничиться посевом одного ряда разбавлений и производить посев, начиная с 1 куб. см (1,0; 0,1; 0,01; 0,001).
Выбранные на посев объемы воды засевают: 1 куб. см пробы воды и 1 куб. см из разбавлений - в 10 куб. см лактозо-пептонной среды нормальной концентрации. Посевы инкубируют 24 +/- 2 часа при температуре 37 +/- 0,5 °C.
Учет результатов. Полное отсутствие изменения среды или помутнение без образования газа позволяет дать отрицательный ответ. Из посевов в среду накопления, где отмечено помутнение и газообразование, производят высев на поверхность подтверждающей плотной среды Эндо с добавлением фуксина, разделенной на 3 - 4 сектора с таким расчетом, чтобы получить изолированные колонии. Посев инкубируют при 37 +/- 0,5 °C 24 - 18 часов. При наличии в среде накопления помутнения и газообразования, а при высеве на подтвержденную среду характерных для ЛКП колоний (темно-красных с металлическим блеском и без него, слизистых крупных, изменяющих цвет среды) дают положительный ответ.
В тех случаях, когда имеет место сомнительная реакция в средах накопления (небольшое газообразование) или на среде Эндо выросли не характерные для ЛКП колонии, подтверждают принадлежность выросших колоний к лактозоположительным кишечным палочкам. По две колонии каждого типа макроскопируют с окраской по Граму, засевают в полужидкую среду с лактозой уколом до дна пробирки и инкубируют при температуре 37 °C. Через 5 часов инкубации посевов производят учет. При образовании кислоты и газа хотя бы в одной пробирке, результат анализа считают положительным. При отсутствии изменений среды дают отрицательный ответ. При наличии только кислоты окончательный ответ учитывают через 24 часа.
Для подтверждения способности бактерий ферментировать лактозу можно использовать и лактозо-пептонную среду накопления с поплавками. Учет результатов в этом случае следует производить через 24 часа.
Ускоренный подтверждающий метод.
В сомнительных случаях на колонии, выросшие на секторе Эндо, накапывают реактив для определения оксидазной активности. При наличии в среде накопления помутнения и газообразования, а на секторе среды Эндо колоний одного из следующих видов: темно-красных с металлический блеском и без него, слизистых розовых крупных, с темно-красным центром, не обладающих оксидазной активностью - дают положительный ответ.
Если все колонии на секторе под воздействием реактива окрасились в сине-фиолетовый цвет или остались без изменения (только розовые плоские лактозоотрицате
