2015-04-23
1410
В гистохимической практике ферменты подразделены на 6 главных классов: оксидоредуктазы, трансферазы, гидролазы, лиазы, изомеразы, лигазы (синтетазы). В ходе стандартной гистоферментной реакции срезы ткани помещают в раствор субстрата и специального вещества, способного образовать конечный продукт реакции в виде окрашенного осадка. Следует исключить возможность инактивации фермента и диффузию конечного продукта реакции.
Ферменты – маркёры характерны для некоторых органелл: кислая фосфатаза — лизосомы, сукцинатдегидрогеназа (СДГ) и цитохромоксидаза — митохондрии, глюкозо-6‑фосфатаза — шероховатая эндоплазматическая сеть, Ca2+-АТФаза — гладкая эндоплазматическая сеть.
В таблице 1-1 приведена сводка наиболее распространённых методов идентификации разных веществ, а на рисунке 1-3А результаты гистохимического выявления активности АТФазы миозина и сукцинатдегидрогеназы в разных типах скелетных мышечных волокон.
Рис. 1-3А. Типы волокон скелетной мышцы. Гистохимическое выявление активности АТФазы миозина и сукцинатдегидрогеназы (СДГ). A (слева) — активность АТФазы миозина: тип I — медленносокращающиеся; II — быстросокращающиеся. Б (справа) — активность СДГ: А — белое (гликолитическое); B — промежуточное (окислительно–гликолитическое); C — красное (окислительное).
|
|
|
Таблица 1-1. Гистохимическое выявление разных веществ
| Определяемое вещество, реакция или выявляющий реактив | ||
| Нуклеиновые кислоты | ||
| Реакция Фёльгена (реактив Шиффа–фуксин) | ||
| Акридиновый оранжевый (с ДНК флюоресценция жёлто-зелёного цвета, с РНК — красно-оранжевого) | ||
| Щелочные красители (толуидиновый синий, метиленовый синий, гематоксилин) | ||
| Белки | ||
| Гистоны и протамины | Прочный зелёный | |
| Аминокислоты | ||
| Тирозин | Реакция Миллона | |
| Аргинин | Реакция Сакагуши | |
| Аминогруппы | Нафтоловый жёлтый | |
| Углеводы | ||
| Поли- и олигосахариды | Реакция Шиффа с перйодной кислотой | |
| Полисахариды | Рутениевый красный | |
| Гликозаминогликаны | Альциановый синий | |
| a‑D–глюкоза и a‑D–манноза | Конканавалин А | |
| N–Ацетилглюкозамин | Агглютинин из зародышей пшеницы | |
| Фукоза | Лектин из семян лотоса | |
| a‑Галактоза | Агглютинин земляного ореха, лектин из сои | |
| Липиды | ||
| Проционовый жёлтый, суданы | ||
