1. Количественное определение активности каталазы по Бану и Зубковой.
В колбочку "О" налить 7мл воды и 1мл крови гемолизированной 1:1000. В колбу "К" налить 7 мл воды и 1мл гемолизированной крови прокипяченной. В обе колбы + 3мл 1% перекиси водорода. Поставить на 30 минут. После этого в обе колбы + 3мл 2N р-ра серной кислоты и титровать обе колбочки до устойчивой слабо-розовой окраски 0,1N р -ром перманганата калия.(КМnО4).
На титрование "К" - 9мл
на титрование "О" - 1,6мл
Активность каталазы (9 - 1,6) х 1,7 = 12,58
Результат:
Вывод:
2. Определение гемоглобина методом прямой фотометрии.
0,1мл крови + 2,9мл дистиллированной воды. Колориметрировать на ФЭКе при зеленом светофильтре против воды, в кюветах на 5мм. Содержание гемоглобина определяется по калибровочному графику.
Результат:
Вывод:
3. Амидопириновая проба на кровь.
0,5мл крови 1:1000 + 3-4 капли амидопиринового реактива + 1-2 капли 30% уксусной кислоты +3-4 капли 3% перекиси водорода. Появляется сиреневое окрашивание.
Результат:
|
|
Вывод:
ПРИЛОЖЕНИЕ
При рождении ребенка кровь пуповины содержит от 140 до 190 г/л гемоглобина, но уже в первые часы после рождения количество его возрастает до 165-225 г/л. Это повышение уровня гемоглобина обусловлено,с одной стороны, переходом организма новорожденного к альвеолярному газообмену, включением системы легочного дыхания, а с другой - реакцией организма на родовой стресс.
Через 2-3 дня показатели гемоглобина падают и к 2 неделям - 1 месяцу жизни ребенка становятся равными уровню его у взрослых (около 160 г/л). После первого месяца жизни ребенка содержание гемоглобина снова
снижается до 100-110 г/л.
Это уменьшение уровня гемоглобина физиологическая анемии у новорожденных - наблюдается на протяжении 2-3 месяцев жизни ребенка. Предполагают, что причиной анемии является недостаточная резорбция железа по сравнению с потребностью в нем сидеропеническая анемия).
Последующее постепенное повышение концентрации гемоглобина обнаруживается к году (примерно до 120 г/л). Окончательный уровень гемоглобина устанавливается к периоду половой зрелости организма.
У недоношенных детей содержание гемоглобина несколько ниже, чем у доношенных, последующее уменьшение происходит быстрее и является более выраженным (до 80-100 г/л). Однако, анемия такого характера не требует лечения, так как после 6месячного возраста показатели гемоглобина у недоношенных детей сравниваются с соответствующими величинами у доношенных.
Гетерогенность гемоглобина
Гемоглобин в организме человека в разные возрастные периоды может существовать в виде нескольких форм, отличающихся белковым компонентом молекулы, то есть аминокислотным составом полипептидных цепей.
|
|
В ранний эмбриональный период в крови человека выявлено 3 формы гемоглобина: гемоглобин - Говер I, II и гемоглобин Портленд. Это так называемые эмбриональные гемоглобины или примитивные - НвР.
К 3 месяцу развития зародыша, в крови исчезают эмбриональные и появляется фетальный гемоглобин (НВ F), включающий 2 и 2 -цепи в состав белковой части молекулы. НВ F является главным типом гемоглобина
плода и составляет к моменту рождения ребенка до 70-90% всего гемоглобина.
У детей 1 месяца жизни НВ F составляет от 50% до 85% всего гемоглобина.
К моменту рождения ребенка на долю гемоглобина А приходится до 10-30%, однако его количество резко увеличивается по мере исчезновения гемоглобина F (в течение 3-4х месяцев после рождения ребенка). Начиная с 3-5 месячного возраста ребенка, реже после 1 года, НВ А становится основным гемоглобином, составляя 96-99%. На долю гемоглобина F в этот период приходится всего лишь 1-2%.
Как было установлено НВ F и НВ А имеют имеют одинаковое сродство к кислороду, но проявляют разную чувствительность к действию аллостерического эффектора - 2,3 дифосфоглицерата (2,3 ДФГ). НВ F слабее связывает 2,3 ДФГ, чем НВ А, поэтому в присутствии 2,3 ДФГ сродство НВ А к кислороду снижается, а у НВ F наоборот возрастает. В этих условиях НВ F плода оксигенируется за счет гемоглобина А матери и обеспечиваются оптимальные условия для транспорта кислорода из крови матери в кровь плода.
Существуют возрастные особенности и в отношении содержания в крови производных гемоглобина. В частности, содержание карбоксигемоглобина сразу после рождения в крови повышено и составляет 1,5-1,65% от общего количества НВ (у взрослых менее 1%). Это повышение связано с усиленным процессом гемолиза эритроцитов и эндогенным образованием СО.