Серологические методы

Принадлежность холерных вибрионов к О1 или О139 серогруппе определяют в слайд-агглютинации или развернутой реакции агглютинации с холерными агглютинирующими сыворотками О1, Инаба, Огава, и с холерной сывороткой О139 серогруппы в соответствии с инструкциями по применению препаратов, а также в других реакциях с иммуноглобулиновыми препаратами, предназначенными для ускоренной диагностики холеры и идентификации возбудителя.

Слайд-агглютинацию ставят на обезжиренном стекле, помещенном в чашку Петри или на дне самой чашки, используя подозрительную на холерный вибрион колонию и (или) агаровую 12–18-часовую культуру и сыворотки О1 серогруппы в разведении 1:50–1:100. Сыворотку О139 разводят в соответствии с указанием на этикетке. Реакцию обязательно сопровождают контролями культуры в 0,9 %-м растворе хлорида натрия.

Развернутую реакцию агглютинации ставят и учитывают по общепринятой методике в соответствии с инструкцией по применению диагностических сывороток.

МФА – метод флюоресцирующих антител. Метод дает возможность ускоренно идентифицировать выделенную культуру, а также выявить возбудителя холеры О1 и О139 серогруппы при содержании его в исследуемом материале не менее чем 10 м.к./мл. Исследованию подлежат выделенная культура, нативный материал (испражнения и рвотные массы) и материал после подращивания.

Реакция непрямой гемагглютинации (РНГА) с использованием диагностикума эритроцитарного холерного иммуноглобулинового

Порядок подготовки материала, ингредиентов, постановки реакции и ее учет изложены в «Инструкции по применению диагностикума эритроцитарного холерного антительного иммуноглобулинового», прилагаемой к препарату.

Использование микротест-систем и СИБ

Для определения оксидазы, образования индола и сероводорода, декарбоксилаз лизина, орнитина, дигидролазы аргинина, ферментации углеводов и многоатомных спиртов при идентификации вибрионов можно также использовать Систему индикаторную бумажную (СИБ) и микротест-ситемы для биохимической идентификации вибрионов.

Микротест-система для биохимической идентификации

вибрионов (MTC-V)

Микротест-система предназначена для определения ферментативной активности микроорганизмов рода Vibrio и идентификации видов. (MTC-V) представляет собой контейнер с ячейками, на дне которых находятся субстратно-индикаторные питательные среды, высушенные при температуре 44–46 С^о, стабилизированные поливиниловым спиртом и стерилизованные ультрафиолетовым облучением. Идентификацию культур, выделяемых непосредственно из нативного материала, производят со скошенного питательного агара рН 7,6 через 18–22 ч инкубации при температуре 37,0 С^о. Микробную взвесь, соответствующую 10 ед. стандарта мутности, готовят в стерильной дистиллированной воде или пептонной воде, по 0,2 мл вносят во все ячейки контейнера.

Учет результатов проводят через 18–22 ч инкубации при температуре 37 С^о в соответствии с цветовым указателем, приложенным к MTC-V.

Микротест-система для ускоренного определения групп

вибрионов по Хейбергу (МТС-Х)

Микротест-система предназначена для ускоренного определения по ферментативной активности групп вибрионов по Хейбергу. (МТС-Х) представляет собой контейнер с ячейками, на дне которых находятся субстратно-индикаторные питательные среды, высушенные при температуре 44–46 С^о, стабилизированные поливиниловым спиртом и стерилизованные ультрафиолетовым облучением. Идентификацию культур, выделяемых непосредственно из нативного материала, производят со скошенного питательного агара рН 7,6 через 18–22 ч инкубации при температуре 37,0 С^о. Микробную взвесь, соответствующую 10 ед. стандарта мутности, готовят в стерильной дистиллированной воде или пептонной воде, по 0,2 мл вносят во все ячейки контейнера. Учет результатов проводят через 4–5 ч инкубации при температуре 37 С^о в соответствии с цветовым указателем, приложенным к МТС-Х.