Организация и методика выполнения работы

Среды, предназначенные для стерилизации в автоклаве, наливают не выше чем на половину высоты сосуда. Сосуды со средами закрывают ватными пробками, которые предохраняют среду от заражения микрофлорой, находящейся в окружающем воздухе. Пробки должны быть достаточно плотными, с равномерным распределением волокон ваты, так как через них проходит газообмен культуры с окружающей средой. Слишком плотные пробирки затрудняют снабжение культур воздухом. Для приготовления пробки плоский кусочек ваты, взятый вдоль волокна, скатывают валиком. Чтобы придать пробке прочность, ее прокатывают между ладонями и частым стеклом лежащим на столе. Длина пробки для обычной пробирки дб. около 4 см. Пробка должна входить в пробирку на 1,5-2 см. Для сохранения формы пробку вынимают из горлышка, слегка вращая. Удобно отвертывать пробку чистой марлевой салфеткой. Нельзя обвертывать пробки сосудов, которые будут стерилизоваться в автоклаве целлофаном или другими материалами, не пропускающими пар, так как пар должен обязательно проникать через пробку в сосуд иначе среды не нагреются до нужной температуры и не прост стерилизуются.

Стерилизация стеклянной посуды:

Основным способом стерилизации стеклянной посуды является стерилизация сухим горячим паром. Она осуществляется в сушильных шкафах или печках Пастера при температуре 160-180° С в течении 1,5-2 часов. При этом погибают и вегетативные клетки и их споры.

Посуда перед стерилизацией должна быть тщательно вымыта и завернута в бумагу для сохранения стерильности после нагревания. Развертывают стерильную бумагу непосредственно перед употреблением. Специфика работы с микроорганизмами требуют применения в микробиологии особой посуды. В частности, микробиологии, постоянно имеют дело с чашками Петри и их модификациями - чашками Коха и Виноградовского.Пипетки готовят к стерилизации так: в концы пипеток, которые берутся в рот, вставляют ватные тампоны. Пипетки заворачивают в длинные полоски бумаги шириной 4-5 см. Обмотку начинают с конца, которым берется среда.

Постепенно движением бумаги по спирали оканчивают обмотку у того конца, который берется в рот. Завернутые пипетки для предохранения их от загрязнения и разрывов бумаги, перед стерилизацией обычно заворачивают по несколько штук вместе или помещают в спиральные металлические и картонные пеналы. Закрепляют бумагу над пипеткой и завязывают ее ниткой, у верхнего и нижнего концов. Каждую чашку Петри лучше завертывать отдельно и закреплять плотной ниткой. Шпатели так же стерилизуют завернутыми в бумагу, каждый из них заворачивают отдельно. Колбы и пробирки закрывают ватными пробками, предохраняющими горлышко от ныли. Посуду загружают в сушильный шкаф не плотно, чтобы обеспечить некоторую циркуляцию воздуху и равномерный надежный прогрев стерилизующего материала. (.утильный шкаф при стерилизации д.б. закрыт. По окончании стерилизации шкаф не открывают до тех пор, пока температура в нем не упадет до 100-70 С. так как при резком охлаждении иногда нарушается стерильность материала, а сильно нагретое стекло может растрескаться. Посулу можно стерилизовать и в автоклаве. Приборы для культивирования микроорганизмов; а так же детали этих приборов, резиновые пробки и шланги стерилизуются автоклавированием. Предметы подлежащие стерилизации в автоклаве, завертывают в бумагу Некоторые предметы (мембранные фильтры, метл. инструменты) иногда стерилизуют длительным кипячением и. дистиллированной воде. Однако этим способом пользуются редко, гак как длительное кипячение может привести к повреждению обрабатываемого материала, а уменьшение времени кипячения не обеспечит стерильности материала Предметы изготовленные из термолабильных пластмасс, например центрефужные пробирки. стерилизуют ультрафиолетовыми.лучами с помощью бактерицидной лампы. После облучения предметы до использования следует хранить в стерильной посуде

Порядок выполнения работы:

1. Уч-ся демонстрируют автоклав,сушильный шкаф, кипятильник Коха, машину для приготовления пробок, преподавать знакомить с устройством и принципом их действия.

2. Подготовить 2 чашки Петри, колбу, 2 пробирки и пипетки к стерилизации.

3. Наполнить 2 пробирки (на 100 мл.) водопроводной водой, 2 колбы (на 100мл.) закрыть ватными пробками.

4. Поместить для стерилизации горячим воздухом в сушильный шкаф подготовленную стеклянную посуду.

5. Поместить пробирки и колбы с водой. а так же колбы с ранее приготовленным мясо-пептонным агаром в корзинки. и все это разместить в автоклаве.

Вопросы для самоконтроля.

1. Что называют стерилизацией '?

2. Какие виды стерилизации вам известны?

3. Какой вид стерилизации наиболее широко применяется в микробиологической практике?

4. Какие методы тепловой обработки вам известны?

5. Как стерилизуют посуду? Как ее готовят к стерилизации?

6. Каким образом удобнее стерилизовать питательные среды?

7. Что называют стерилизацией? В чем сущность метода стерилизации '?

8. Зачем вводят фильтры в пипетки перед стерилизацией?

9. Как готовить биологическую пробку? Какие требования предъявляются к биологическим пробкам?

10.Каково назначение аппаратов. автоклава кипятильника Коха сушильного шкафа?

Домашнее задание:

1. Оформление отчета по лабораторному занятию.

2. Подготовиться к защите лабораторного занятия.

Лабораторная работа № 6