Серологические исследования

Серологические тесты позволяют обнаружить антитела к вирусным антигенам. Методы иммуно­ферментного анализа (ИФА) первого поколения предусматривают использование рекомбинантного антигена с100 (см. рис. 16-30, табл. 16-13). В после­дующих тестах использовались рекомбинантные и синтетические пептиды HCV, оказавшиеся более чувствительными и специфичными (табл. 16-14).

Методы ИФА третьего поколения основаны на использовании антигенов из сердцевинной части, а также NS3-, NS4- и М55-участков вируса [18]. Определявшиеся в тестах первого поколения анти­тела к с 100 появляются только через 4—6 мес, а иногда даже через 1 год после заражения. В то же время антитела к с33 появляются рано: на 11-й неделе у некоторых больных, а на 20-й неделе после начала заболевания — у всех (рис. 16-31). Однако наблюдаются ложноположительные результаты, а средний период между заражением и обнаружени­ем антител составляет 12 нед [13]. Исследование донорской крови методом ИФА обеспечивает 100% профилактику заражения реципиентов HCV [65]. Тесты R1BA третьего поколения позволили значи­тельно уменьшить число ложноположительных ре­зультатов [73], но полностью устранить их не уда­лось [19].

Рис. 16-29. Идентификация клона HCV из печени шимпанзе, инфицированной вирусом ни А ни В, способствовала раз­работке тестов на выявление антител |68|.

Для выявления нуклеотидных последовательно­стей HCV (HCV-PHK) в печени и сыворотке ис­пользуется метод ПЦР с кДНК. Они присутству­ют обычно у лиц с наличием анти-НСV-антител и подтверждают заразность больного [29]. Однако HCV-PHK может быть выявлена также у больных, у которых отсутствуют анти-НСV-антитела, и, сле­довательно, на основании только теста на анти-НСV-антитела можно недооценить распространён­ность HCV-инфекции. Определение HCV-PHK по­зволяет уточнить, являются ли анти-НСV-антитела свидетельством активной или просто перенесён­ной в прошлом инфекции. При ведении больных с хронической HCV-инфекцией следует опирать­ся на определение HCV-PHK, а не на такой не­специфический показатель, как активность сыво­роточных трансаминаз. ПЦР— сверхчувствитель­ный метод, однако она слишком сложна, занимает много времени, требует больших материальных затрат и не исключает несовпадения результатов разных лабораторий, что ограничивает её исполь­зование в широкой практике.

Новый количественный метод основан на амп­лификации сигнала разветвлённой ДНК (рДНК) [39]. Это дорогой, но общедоступный и технически более простой метод, который, однако, менее чувствителен, чем ПЦР. Тест с рДНК может быть отрицательным, несмотря на виремию [II]. Кровь для исследования берут с соблюдением всех необ­ходимых условий, центрифугируют не позднее чем через 2 ч после образования сгустка. Сыворотку тотчас отделяют и по возможности замораживают в течение 2 ч после взятия [20]. С помощью теста рДНК на HCV-PHK у большинства анти-HCV-положительных доноров была выявлена HCV-PHK. Однако результаты этого теста не коррелировали с активностью трансаминаз [45], которая может быть нормальной даже при высоких титрах циркулиру­ющего вируса. Уровень сывороточной HCV-PHK, определяемый методом ПЦР с рДНК, коррелиру­ет с тяжестью гистологических изменений [45]. Метод позволяет контролировать эффективность лечения [20].

Таблица 16-13. Частота выявления (в %) анти-HCV среди доноров крови с помощью метода ИФА и дополнительных тестов [3]

Регион	Частота выявления
Великобритания	0,075-0,01
Скандинавия	0,01-0,1
Северная Америка	0,3
Средиземноморье	0,67
Южная Америка	2,0
Африка	1,4
Япония	2,2
Австралия	0,06
Египет
Группы риска
Больные гемофилией
Наркоманы
Гомосексуалисты

Уровень анти-HCV IgM коррелирует с активно­стью вирусной инфекции и биохимическими при­знаками активной болезни печени при острой и хронической HCV-инфекции [12, 55].

Вирус не удалось культивировать. Чувствитель­ны к HCV лишь человек и приматы. Вирус визуа­лизирован путём электронной микроскопии с ис­пользованием иммунологических методов иссле­дования [34, 59].

Таблица 16-14. Результаты серологических тестов на гепатит С в зависимости от используемых бел­ковых антигенов из различных доменов вирусного генома

Белковый антиген	Неструктурный участок clOO 5-1-1 с33	Сердцевина с22
ИФА 1 RIBA 2** ИФА 2 / RIBA 4	+ + + + + +*	+

* Появляется рано, на 11—20-й неделе. Методом ПЦР выявляется также HCV-PHK.

** Метод рекомбинантного иммуноблотинга.

Рис. 16-30. HCV является одноцепочеч­ным РНК-содержащим вирусом, покры­тым оболочкой, размерами 50—60 нм. Он имеет сердцевинный (С), оболочечный (Е) и неструктурные (Ns) домены. По­казано расположение полипротеинов, кодируемых HCV. Представлено взаимо­расположение отдельных вирусных бел­ков с22, с33 и с100. Указаны предпола­гаемые вирусные домены, кодирующие полипротеины.

Рис. 16-31. Динамика серологических маркёров хроничес­кого гепатита С. Как видно, HCV-PHK появляется рано, до повышения активности АлАТ, и определяется в течение длительного времени. Антитела к с22/33 появляются через 12 нед, а антитела к c100 — приблизительно только через 20 нед после заражения.