Определение ингибирующих веществ в молоке

Ингибирующими веществами, попадающими в молоко, чаще всего могут быть антимикробные и дезинфицирующие средства. Первые выде­ляются молочной железой при различных способах применения больным.животным, в том числе и при интрацистернальном введении. Вторые попадают в сборное молоко в результате недостаточного отмывания проточной водой доильного оборудования и молочной посуды.

а ) С индикатором резазурином.

Метод основанна восстановлении резазурина при развитии в молоке чувствительного к ингибирующим веществам микроба вида Stгерtососсus thermophilus.

Приготовдение коллекционной тест-культуры:

В пробирку с 10 мл стерильного обезжиренного молока вносят одну петлю культуры Stгерtососсus thermophilus и выдерживают в термостате при температуре 42-43°С в течение 16-18 ч. Коллекцион­ную тест-культуру хранят при температуре 6-8°С и перевивают через 10-14 суток.

Приготовление рабочей тест-культуры:

В пробирку с 10 мл или баночку со 100 мл обезжиренного моло­ка вносят соответственно 1 петлю или I мл коллекционной тест-культуры и выдерживают в термостате при температуре 42-43°С в течение 16-18 ч.

Проведение анализа:

Для анализа используют 1-2-суточную рабочую тест-культуру при условии хранения ее в холодильнике при температуре 6-8°С.

В чистые пробирки наливают по 10 мл исследуемого молока и закрывают стерильными резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы молока сохраняют в холодильнике при температуре 6-8°С. Одновре­менно проводят контрольный анализ. Для этого в пробирку наливают 10 мл молока, свободного от ингибирующих веществ. Это молоко мож­но хранить в холодильнике при температуре 6-8°С не более суток. Пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой нагревают в водяной бане до 85-90°С, выдерживают 10 мин. затем охлаждают до 43-45°С. После этого в пробирки стерильной пипеткой вносят по 0,3 мл рабочей тест-культуры. Содержимое пробирок тщательно пере­мешивают путем трехкратного переворачивания и выдерживают при температуре 42-43°С в редуктазнике или водяной бане в течение 2 ч. После этого во все пробирки вносят по 1 мл 0,05% раствора резазурина с температурой не ниже 18-20°С. Содержимое пробирок тща­тельно перемешивают. Пробирки с исследуемым молоком и контрольной пробой выдерживают в редуктазнике или водяной бане при температу­ре 42-43°С в течение 15мин.

Учет результатов:

При отсутствии в молоке ингибирующих веществ (и в контроль­ной пробе) содержимое, пробирок будет иметь розовый или белый цвет.

При наличии в молоке ингибирующих веществ содержимое проби­рок будет иметь сине-стальную, сине-фиолетовую иди фиолетовую, окраску.

Чувствительность метода позволяет обнаружить в молоке содержание пенициллина более 0,01 МЕ/мл, формалина около 0,005%, пере­киси водорода, более 0,01%

б) С индикатором метиленовым голубым

Метод основан на восстановлении метиленового голубого при развитии в молоке чувствительных к ингибирующим веществам микро­организмов вида Stгерtососсus thermophilus.

Готовят коллекционную и рабочую тест-культуру.

Приготовление 3% водного раствора пептона. Проводятпо ре­цепту 14.

Приготовление 0,5% раствора метиленового голубого. 500 мг метиленового голубого помещают в колбу, доливают до 100 мл дис­тиллированной кипяченной водой, перемешивают до полного растворе­ния, плотно укупоривают и хранят в холодильнике при температуре 6-8°С не более 30 суток.

Приготовление смеси для анализа:

К 20 мл 3% водного раствора пептона добавляют 3,5 мл односуточной культуры термофильного стрептококка (пипетку предваритель­но следует хорошо ополоснуть этой смесью) и 0,1 мл 0,5% водного раствора метиленового голубого. Смесь хороша перемешивают. Смесь готовят перед анализом.

Проведение анализа:

В чистые пробирки наливают по 10мл исследуемого молока и закрывают (неплотно) резиновыми пробками. Оставшуюся часть пробы хранят в холодильнике при температуре 6-7°С в течение суток. Про­бирки с молоком нагревают в водяной бане до температуры 85-90°С и выдерживают 10 мин, затем охлаждают до 42-45°С. После этого впробирки вносят стерильной пипеткой по 2 мл приготовленной смеси, перемешивают путем трехкратного переворачивания пробирок и выдерживают в водяной бане при температуре 41-42°С в течение 1 ч 40 мин - 2 ч 20 мин.

Учет результатов:

При отсутствии в молоке ингибирующих веществ содержимое про­бирок будет иметь белый цвет.

При наличии в молоке ингибирующих веществ содержимое проби­рок будет иметь голубой цвет. Голубое кольцо, образующиеся в про­бирке на поверхности молока высотой 1 см, не учитывают.

Чувствительность метода позволяет обнаружить пенициллин от 0,01 до 0,1 МЕ/мл, стрептомицин от 30-50 мкг/мл, тетрациклин, окситетрацикдин -1 МЕ/мл, олеандомицин -10 МЕ/мл, формалин - от 0,003 до 0,005%, перекись водорода от 0,01 до 0,1%.